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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » DNS法测定α淀粉酶抑制实验
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食品考研！

新虫 (小有名气)
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DNS法测定α淀粉酶抑制实验
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新手做酶，做的是某种功能因子对α淀粉酶的抑制作用，采用DNS法，是很多种英文文献经常用的方法
1:加500ul的样品，然后加500ul 0.5mg/ ml的淀粉酶，然后28度放置10分钟。
2:然后加500ul的1%的可溶性淀粉溶液。再28度放置10分钟。
3:最后加入500ul DNS显色剂。100度沸水煮5分钟。冷却置室温，定容至10ml.


淀粉酶和可溶性淀粉都是用的0.02M PBS(含氯化钠)。
我用的酶是上海源叶生物的粉末猪胰酶，

在溶解可溶性淀粉时候直接室温溶解，结果淀粉都会沉淀下来，取得上清液，这个操作准确吗？还是用沸水稍微沸一下呢？

但是最后用DNS煮沸的时候颜色都会变得差不多，就连最常用的酶抑制剂阿卡波糖颜色都差不多，根本无抑制可言。。我查了很多资料，也没有找到问题，请各位大佬指点迷津。。谢谢啦！

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1楼 2019-09-05 10:44:00
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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)
★
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1）可溶性淀粉确实需要加热才能溶解，看你的实验目的决定是否加热促使其溶解；
2）关于抑制方法，推荐你2篇相关文献供你参考：
Starch digestion in intact pulse cotyledon cells depends on the extent of thermal treatment
In-vitro inhibitory effects of flavonoids in Rosa roxburghii and R. sterilis fruits on α-glucosidase: Effect of stomach digestion on flavonoids alone and in combination with acarbose
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10楼2020-08-11 00:11:00
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是姜姜姜！

铁虫 (初入文坛)
★
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您好，我现在也在做这个，用的也是源叶的猪胰淀粉酶，溶解不了，有絮状物，请问您是怎么溶解的呢，需要过滤或者离心吗
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14楼2022-06-15 14:06:13
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食品考研！

新虫 (小有名气)
我查资料看到别人用的sigma的猪胰腺淀粉酶，我用的也是猪胰腺淀粉酶，只是公司不同，这个应该没有啥问题吧！

另外DNS也是配置放了10多天采用的。

做不出来我觉得我快抑郁啦！。。。，

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3楼2019-09-05 10:46:51
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Watch you

新虫 (小有名气)
★
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可溶性淀粉在沸水才会溶解

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8楼2019-10-17 10:58:27
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初见166

新虫 (初入文坛)
★
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遇到类似问题，想问一下淀粉酶是溶于6.8的磷酸缓冲液吗。我试了不同浓度的淀粉酶都不溶于缓冲液，很是苦恼呀，离心淀粉酶之后实验完全做不出来，会不会是离心之后的上清液酶活力太小了。谢谢啦
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9楼2020-08-10 10:05:05
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海韵楠馨

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 食品考研！ at 2019-09-05 10:46:51
我查资料看到别人用的sigma的猪胰腺淀粉酶，我用的也是猪胰腺淀粉酶，只是公司不同，这个应该没有啥问题吧！
另外DNS也是配置放了10多天采用的。
做不出来我觉得我快抑郁啦！。。。，
...

你好，请问你的问题解决了吗？我也遇到到了相同的问题，求指教。
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11楼2021-04-03 16:40:51
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海韵楠馨

新虫 (小有名气)
★
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9楼: Originally posted by 初见166 at 2020-08-10 10:05:05
遇到类似问题，想问一下淀粉酶是溶于6.8的磷酸缓冲液吗。我试了不同浓度的淀粉酶都不溶于缓冲液，很是苦恼呀，离心淀粉酶之后实验完全做不出来，会不会是离心之后的上清液酶活力太小了。谢谢啦

我看了很多文献一般是1mM6.9的PBS溶液，淀粉酶应该挺好溶解于PBS中，不过我没用那么高的浓度，10U，0.2mg/mL
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12楼2021-04-03 16:44:06
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小芳草Emma

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 初见166 at 2020-08-10 10:05:05
遇到类似问题，想问一下淀粉酶是溶于6.8的磷酸缓冲液吗。我试了不同浓度的淀粉酶都不溶于缓冲液，很是苦恼呀，离心淀粉酶之后实验完全做不出来，会不会是离心之后的上清液酶活力太小了。谢谢啦

可以换个高活性的淀粉酶，一般试剂官网上会写酶的溶解度及酶活计算方法。
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13楼2022-05-10 19:43:11
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hmxzoo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 初见166 at 2020-08-10 10:05:05
遇到类似问题，想问一下淀粉酶是溶于6.8的磷酸缓冲液吗。我试了不同浓度的淀粉酶都不溶于缓冲液，很是苦恼呀，离心淀粉酶之后实验完全做不出来，会不会是离心之后的上清液酶活力太小了。谢谢啦

请问你这个问题解决了吗 我也是这样

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15楼2024-01-07 17:18:56
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hdchina20102楼
2019-09-05 10:44   回复  
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skhonor1154楼
2019-09-05 10:49   回复  
食品考研！(金币+1): 谢谢参与
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nefuwpz5楼
2019-09-05 10:58   回复  
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wxiaona6楼
2019-09-05 10:58   回复  
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tzynew7楼
2019-09-05 11:05   回复  
食品考研！(金币+1): 谢谢参与
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