动物组织匀浆的问题
想问一下各位大大,动物组织在匀浆完成后,开始离心,是否必须离心到完全澄清?
试剂盒的说明书上面给的建议是2000rpm,15min,但是这么离心出来的样本完全是浑浊的
我想知道,如果是测试MDA、SOD等等指标(比色法),是不是要把匀浆离心到完全澄清?或者应该是离心到浑浊但无明显沉淀即可?
备注:使用的匀浆介质是0.86%生理盐水或者0.1M PBS
问题2:如果是做WB或者ELISA,是不是要离心至完全澄清? 返回小木虫查看更多
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组织样本先放入2-8摄氏度12小时,然后放入室温平行1小时,生理盐水冲洗,滤纸吸干周围水分,然后切取组织称取重量,然后按照组织匀浆比例进行样本处理即可。
1、对于样本要求保持鲜重
2、称取样本中的重量不小于50mg,一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。
3、匀浆的比例选取10%,相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。
4、匀浆液选取PBS(PH=7.2-7.4,浓度为0.01mol/L)
5、匀浆过程选用组织匀浆器,冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨)
6、离心取上清,离心转速选用5000转每分,时间是15分钟。取上清液待检!
谢谢回复,但是我想问的是,上清这个概念问题,是不是要澄清呢?还是说,那种浑浊但无明显沉淀的即可
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忘记送你一朵花了~~~再次感谢~~~
如果样本稍微有一点乳白色不受影响,如果是浑浊的上清,对检测结果还是有影响的,建议再次离心,或者离心的时候加大转速
谢谢~~~这下知道怎么办了~~~
额......我怎么把悬赏金币给你啊???尴尬了.......