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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 动物组织匀浆的问题
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者LIFERESET将赠送您 10 个金币

LIFERESET

新虫 (初入文坛)

[求助] 动物组织匀浆的问题已有2人参与

想问一下各位大大，动物组织在匀浆完成后，开始离心，是否必须离心到完全澄清？

试剂盒的说明书上面给的建议是2000rpm，15min，但是这么离心出来的样本完全是浑浊的

我想知道，如果是测试MDA、SOD等等指标（比色法），是不是要把匀浆离心到完全澄清？或者应该是离心到浑浊但无明显沉淀即可？


备注：使用的匀浆介质是0.86%生理盐水或者0.1M PBS


问题2：如果是做WB或者ELISA，是不是要离心至完全澄清？
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1楼2019-08-15 11:45:07
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jsktsw_xian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
组织样本先放入2-8摄氏度12小时，然后放入室温平行1小时，生理盐水冲洗，滤纸吸干周围水分，然后切取组织称取重量，然后按照组织匀浆比例进行样本处理即可。

1、对于样本要求保持鲜重
2、称取样本中的重量不小于50mg，一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。
3、匀浆的比例选取10%，相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。
4、匀浆液选取PBS（PH=7.2-7.4，浓度为0.01mol/L）
5、匀浆过程选用组织匀浆器，冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨)
6、离心取上清，离心转速选用5000转每分，时间是15分钟。取上清液待检！
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LIFERESET
2楼2019-08-15 15:39:14
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jsktsw_xian at 2019-08-15 15:39:14
组织样本先放入2-8摄氏度12小时，然后放入室温平行1小时，生理盐水冲洗，滤纸吸干周围水分，然后切取组织称取重量，然后按照组织匀浆比例进行样本处理即可。

1、对于样本要求保持鲜重
2、称取样本中的重量不小于 ...

谢谢回复，但是我想问的是，上清这个概念问题，是不是要澄清呢？还是说，那种浑浊但无明显沉淀的即可？？？
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3楼2019-08-15 15:56:08
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jsktsw_xian at 2019-08-15 15:39:14
组织样本先放入2-8摄氏度12小时，然后放入室温平行1小时，生理盐水冲洗，滤纸吸干周围水分，然后切取组织称取重量，然后按照组织匀浆比例进行样本处理即可。

1、对于样本要求保持鲜重
2、称取样本中的重量不小于 ...

忘记送你一朵花了~~~再次感谢~~~
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4楼2019-08-15 16:03:02
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jsktsw_xian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果样本稍微有一点乳白色不受影响，如果是浑浊的上清，对检测结果还是有影响的，建议再次离心，或者离心的时候加大转速
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5楼2019-08-16 16:27:52
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jsktsw_xian at 2019-08-16 16:27:52
如果样本稍微有一点乳白色不受影响，如果是浑浊的上清，对检测结果还是有影响的，建议再次离心，或者离心的时候加大转速

谢谢~~~这下知道怎么办了~~~
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6楼2019-08-21 15:37:25
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jsktsw_xian at 2019-08-16 16:27:52
如果样本稍微有一点乳白色不受影响，如果是浑浊的上清，对检测结果还是有影响的，建议再次离心，或者离心的时候加大转速

额......我怎么把悬赏金币给你啊？？？尴尬了.......
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7楼2019-08-21 15:39:33
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p1w9

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jsktsw_xian at 2019-08-15 15:39:14
组织样本先放入2-8摄氏度12小时，然后放入室温平行1小时，生理盐水冲洗，滤纸吸干周围水分，然后切取组织称取重量，然后按照组织匀浆比例进行样本处理即可。

1、对于样本要求保持鲜重
2、称取样本中的重量不小于 ...

大佬，这个匀浆液的比例可不可以稍微放大点？1:10可以吗？

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8楼2020-11-07 03:05:52
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2020-11-07 04:32:33
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