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烟草基因组提取呈现胶冻状难溶物

作者 Abrahamyang: 来源: 小木虫 450 9 举报帖子

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根据经典CTAB法提取烟草叶片基因组DNA，加入异丙醇后出现白色絮状沉淀，用70%乙醇洗涤后吹干，用水或者TE溶解，均难以溶解，呈现胶冻状物质，也无法再次用裂解液溶解，该怎么解决？寻求帮助返回小木虫查看更多

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寒冰利剑

建议提取DNA的样品不宜过多，用氯仿异戊醇抽提时不要吸到有机相，可以少吸一点上清，异丙醇用等体积低温沉降DNA，再试试。
Abrahamyang

试过了，还是没有办法解决这个问题，不过仍然感谢您
hanzegang

样品量不要太多，氯仿异戊醇抽提两次，溶解的时候稍微加多一点水或TE，37度温浴溶解。
Abrahamyang

引用回帖:
4楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 18:35:04
样品量不要太多，氯仿异戊醇抽提两次，溶解的时候稍微加多一点水或TE，37度温浴溶解。

我用了TE过夜溶解都没能溶解掉它们，真是顽固啊它们
hanzegang

引用回帖:
5楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:03:59
我用了TE过夜溶解都没能溶解掉它们，真是顽固啊它们...

重新用氯仿异戊醇抽提一遍试试，就是从加氯仿异戊醇开始把下面的步骤再进行一遍。最后TE多加点，50微升起。
另外，会不会是你磨样的时候，吸取上清的时候操作有问题，问问同实验室的其他人。
Abrahamyang

引用回帖:
6楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 19:17:01
重新用氯仿异戊醇抽提一遍试试，就是从加氯仿异戊醇开始把下面的步骤再进行一遍。最后TE多加点，50微升起。
另外，会不会是你磨样的时候，吸取上清的时候操作有问题，问问同实验室的其他人。...

实验室就我自己做这个烟草，我也感觉我操作有问题，因为别人都是用这个方法没遇到我这样的问题，用其他方法还是这样的现象，但我不知道该怎么排除我操作哪一步出了问题，麻烦您帮我分析一下，哪一步操作最有可能出现问题，我实在分析不出来了
，
Abrahamyang

引用回帖:
7楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:26:46
实验室就我自己做这个烟草，我也感觉我操作有问题，因为别人都是用这个方法没遇到我这样的问题，用其他方法还是这样的现象，但我不知道该怎么排除我操作哪一步出了问题，麻烦您帮我分析一下，哪一步操作最有可能出 ...

提取的基因组DNA不但用水或者TE无法溶解，就是放到裂解液里想要重新抽提，都溶解不了，这顽固分子究竟是什么？