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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

[求助] 烟草基因组提取呈现胶冻状难溶物

根据经典CTAB法提取烟草叶片基因组DNA，加入异丙醇后出现白色絮状沉淀，用70%乙醇洗涤后吹干，用水或者TE溶解，均难以溶解，呈现胶冻状物质，也无法再次用裂解液溶解，该怎么解决？寻求帮助
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1楼 2017-01-10 23:40:36
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hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Abrahamyang: 金币+5, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2017-01-12 14:17:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:03:59
我用了TE过夜溶解都没能溶解掉它们，真是顽固啊它们...

重新用氯仿异戊醇抽提一遍试试，就是从加氯仿异戊醇开始把下面的步骤再进行一遍。最后TE多加点，50微升起。
另外，会不会是你磨样的时候，吸取上清的时候操作有问题，问问同实验室的其他人。
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6楼2017-01-11 19:17:01
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普通回帖

寒冰利剑

金虫 (小有名气)
建议提取DNA的样品不宜过多，用氯仿异戊醇抽提时不要吸到有机相，可以少吸一点上清，异丙醇用等体积低温沉降DNA，再试试。

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岂能尽如人意，但求无愧我心。
2楼2017-01-10 23:55:11
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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)
试过了，还是没有办法解决这个问题，不过仍然感谢您
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3楼2017-01-11 08:36:01
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hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

样品量不要太多，氯仿异戊醇抽提两次，溶解的时候稍微加多一点水或TE，37度温浴溶解。
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4楼2017-01-11 18:35:04
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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 18:35:04
样品量不要太多，氯仿异戊醇抽提两次，溶解的时候稍微加多一点水或TE，37度温浴溶解。

我用了TE过夜溶解都没能溶解掉它们，真是顽固啊它们
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5楼2017-01-11 19:03:59
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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 19:17:01
重新用氯仿异戊醇抽提一遍试试，就是从加氯仿异戊醇开始把下面的步骤再进行一遍。最后TE多加点，50微升起。
另外，会不会是你磨样的时候，吸取上清的时候操作有问题，问问同实验室的其他人。...

实验室就我自己做这个烟草，我也感觉我操作有问题，因为别人都是用这个方法没遇到我这样的问题，用其他方法还是这样的现象，但我不知道该怎么排除我操作哪一步出了问题，麻烦您帮我分析一下，哪一步操作最有可能出现问题，我实在分析不出来了！
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7楼2017-01-11 19:26:46
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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:26:46
实验室就我自己做这个烟草，我也感觉我操作有问题，因为别人都是用这个方法没遇到我这样的问题，用其他方法还是这样的现象，但我不知道该怎么排除我操作哪一步出了问题，麻烦您帮我分析一下，哪一步操作最有可能出 ...

提取的基因组DNA不但用水或者TE无法溶解，就是放到裂解液里想要重新抽提，都溶解不了，这顽固分子究竟是什么？
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8楼2017-01-11 19:30:23
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hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Abrahamyang: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-01-12 14:18:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:30:23
提取的基因组DNA不但用水或者TE无法溶解，就是放到裂解液里想要重新抽提，都溶解不了，这顽固分子究竟是什么？...

按道理来说，烟草的DNA很好提取，你的问题我也没有遇到过。说几点，自己认为可能的原因吧。
1） 尽量取幼嫩的烟草叶片，不要太多，1至2g就足够了；
2）磨样的时候尽量快，而且要磨彻底，用液氮磨样或者直接在EP管里磨样都可以；
3） 吸取上清的时候，要轻柔。氯仿异戊醇可以抽提两次；
4）异丙醇沉淀后，酒精洗上两次，吹干溶解。
另外，你仔细看看自己配的提取液啊什么的，不要有问题，PH值调对。
我能想到的，只有这么多了。
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Abrahamyang
9楼2017-01-11 19:43:31
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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
9楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 19:43:31
按道理来说，烟草的DNA很好提取，你的问题我也没有遇到过。说几点，自己认为可能的原因吧。
1） 尽量取幼嫩的烟草叶片，不要太多，1至2g就足够了；
2）磨样的时候尽量快，而且要磨彻底，用液氮磨样或者直接在EP管 ...

谢谢你的分析，我会仔细分析我的错误在哪里的！
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10楼2017-01-12 09:21:50
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