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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

[求助] 烟草基因组提取呈现胶冻状难溶物

根据经典CTAB法提取烟草叶片基因组DNA,加入异丙醇后出现白色絮状沉淀,用70%乙醇洗涤后吹干,用水或者TE溶解,均难以溶解,呈现胶冻状物质,也无法再次用裂解液溶解,该怎么解决?寻求帮助
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hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Abrahamyang: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-01-12 14:18:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:30:23
提取的基因组DNA不但用水或者TE无法溶解,就是放到裂解液里想要重新抽提,都溶解不了,这顽固分子究竟是什么?...

按道理来说,烟草的DNA很好提取,你的问题我也没有遇到过。说几点,自己认为可能的原因吧。
1) 尽量取幼嫩的烟草叶片,不要太多,1至2g就足够了;
2)磨样的时候尽量快,而且要磨彻底,用液氮磨样或者直接在EP管里磨样都可以;
3) 吸取上清的时候,要轻柔。氯仿异戊醇可以抽提两次;
4)异丙醇沉淀后,酒精洗上两次,吹干溶解。
另外,你仔细看看自己配的提取液啊什么的,不要有问题,PH值调对。
我能想到的,只有这么多了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2017-01-11 19:43:31
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)

建议提取DNA的样品不宜过多,用氯仿异戊醇抽提时不要吸到有机相,可以少吸一点上清,异丙醇用等体积低温沉降DNA,再试试。

发自小木虫Android客户端
岂能尽如人意,但求无愧我心。
2楼2017-01-10 23:55:11
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Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

试过了,还是没有办法解决这个问题,不过仍然感谢您
3楼2017-01-11 08:36:01
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hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

样品量不要太多,氯仿异戊醇抽提两次,溶解的时候稍微加多一点水或TE,37度温浴溶解。
4楼2017-01-11 18:35:04
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