24小时热门版块排行榜    

查看: 1888  |  回复: 9
本帖产生 1 个 博学EPI ,点击这里进行查看

Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

[求助] 烟草基因组提取呈现胶冻状难溶物

根据经典CTAB法提取烟草叶片基因组DNA,加入异丙醇后出现白色絮状沉淀,用70%乙醇洗涤后吹干,用水或者TE溶解,均难以溶解,呈现胶冻状物质,也无法再次用裂解液溶解,该怎么解决?寻求帮助

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒冰利剑

金虫 (小有名气)

建议提取DNA的样品不宜过多,用氯仿异戊醇抽提时不要吸到有机相,可以少吸一点上清,异丙醇用等体积低温沉降DNA,再试试。

发自小木虫Android客户端
岂能尽如人意,但求无愧我心。
2楼2017-01-10 23:55:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

试过了,还是没有办法解决这个问题,不过仍然感谢您
3楼2017-01-11 08:36:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

样品量不要太多,氯仿异戊醇抽提两次,溶解的时候稍微加多一点水或TE,37度温浴溶解。
4楼2017-01-11 18:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 18:35:04
样品量不要太多,氯仿异戊醇抽提两次,溶解的时候稍微加多一点水或TE,37度温浴溶解。

我用了TE过夜溶解都没能溶解掉它们,真是顽固啊它们
5楼2017-01-11 19:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Abrahamyang: 金币+5, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2017-01-12 14:17:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:03:59
我用了TE过夜溶解都没能溶解掉它们,真是顽固啊它们...

重新用氯仿异戊醇抽提一遍试试,就是从加氯仿异戊醇开始把下面的步骤再进行一遍。最后TE多加点,50微升起。
另外,会不会是你磨样的时候,吸取上清的时候操作有问题,问问同实验室的其他人。
6楼2017-01-11 19:17:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 19:17:01
重新用氯仿异戊醇抽提一遍试试,就是从加氯仿异戊醇开始把下面的步骤再进行一遍。最后TE多加点,50微升起。
另外,会不会是你磨样的时候,吸取上清的时候操作有问题,问问同实验室的其他人。...

实验室就我自己做这个烟草,我也感觉我操作有问题,因为别人都是用这个方法没遇到我这样的问题,用其他方法还是这样的现象,但我不知道该怎么排除我操作哪一步出了问题,麻烦您帮我分析一下,哪一步操作最有可能出现问题,我实在分析不出来了!
7楼2017-01-11 19:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:26:46
实验室就我自己做这个烟草,我也感觉我操作有问题,因为别人都是用这个方法没遇到我这样的问题,用其他方法还是这样的现象,但我不知道该怎么排除我操作哪一步出了问题,麻烦您帮我分析一下,哪一步操作最有可能出 ...

提取的基因组DNA不但用水或者TE无法溶解,就是放到裂解液里想要重新抽提,都溶解不了,这顽固分子究竟是什么?
8楼2017-01-11 19:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Abrahamyang: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-01-12 14:18:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by Abrahamyang at 2017-01-11 19:30:23
提取的基因组DNA不但用水或者TE无法溶解,就是放到裂解液里想要重新抽提,都溶解不了,这顽固分子究竟是什么?...

按道理来说,烟草的DNA很好提取,你的问题我也没有遇到过。说几点,自己认为可能的原因吧。
1) 尽量取幼嫩的烟草叶片,不要太多,1至2g就足够了;
2)磨样的时候尽量快,而且要磨彻底,用液氮磨样或者直接在EP管里磨样都可以;
3) 吸取上清的时候,要轻柔。氯仿异戊醇可以抽提两次;
4)异丙醇沉淀后,酒精洗上两次,吹干溶解。
另外,你仔细看看自己配的提取液啊什么的,不要有问题,PH值调对。
我能想到的,只有这么多了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2017-01-11 19:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Abrahamyang

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by hanzegang at 2017-01-11 19:43:31
按道理来说,烟草的DNA很好提取,你的问题我也没有遇到过。说几点,自己认为可能的原因吧。
1) 尽量取幼嫩的烟草叶片,不要太多,1至2g就足够了;
2)磨样的时候尽量快,而且要磨彻底,用液氮磨样或者直接在EP管 ...

谢谢你的分析,我会仔细分析我的错误在哪里的!
10楼2017-01-12 09:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Abrahamyang 的主题更新
信息提示
请填处理意见