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酶蛋白自沉淀问题

作者 chaoen: 来源: 小木虫 250 5 举报帖子

由于实验室传统，所有Histag纯化的酶都是迅速冷冻后，在-80条件保存，一般都没有问题，酶当中有250 mM imidazole还有50mM左右磷酸盐和氯化钠。但今天准备测定几个酶的酶活，发现其中一个酶在化冻后，大概几个小时后，开始出现大量沉淀。在常温和冰上化冻都出现相同现象。刚化冻后的酶液检测是有活力的。
请教一下是否有朋友遇到类似问题，是不是因为imidazole的原因使酶变性了？或者还有可能是其他情况？多谢！返回小木虫查看更多

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精华评论

wd_bio

新纯化的蛋白，暂时不急冻，看看是不是也会过几小时沉淀，假如是，那可能是蛋白聚合沉淀。可以在纯化中加少量温和变性剂试试。
chaoen

引用回帖:
2楼: Originally posted by wd_bio at 2013-03-22 03:48:09
新纯化的蛋白，暂时不急冻，看看是不是也会过几小时沉淀，假如是，那可能是蛋白聚合沉淀。可以在纯化中加少量温和变性剂试试。

多谢回复。那你是不是觉得imidazole导致沉淀的可能性不大？另外，请问哪些温和变性剂可以用来防止蛋白聚合沉淀呢
，
wd_bio

温和的变性剂例如SDS，低浓度的尿素，或者低浓度Triton-X100都可以，但是判断哪个有效可能就要作预实验分析了。
qqxs

应该不是咪唑的原因。估计是酶本身不稳定（如其保持结构需要特殊金属离子）
冼亮淀粉酶

我觉得SDS挺悬乎，得看酶，我的酶遇到5mM的SDS就不行了。