适配体 aptamer 与分析物相互作用相关
适配体aptamer 如何能有效的与分析物结合,例如VEGF165与VEGF165 aptamer 有效结合需要注意哪些条件?比如温度,ph,离子强度, 这与抗体与抗原的相互作用有什么主要区别?
如何让适配体高效结合分析物呢?
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适配体aptamer 如何能有效的与分析物结合,例如VEGF165与VEGF165 aptamer 有效结合需要注意哪些条件?比如温度,ph,离子强度, 这与抗体与抗原的相互作用有什么主要区别?
如何让适配体高效结合分析物呢?
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aptamer与靶标的结合条件,主要取决于aptamer的筛选条件。对于一些用得比较多的aptamer,有不少参考文献。当然,现在有的文献比较水,要注意杂志的档次和文章的作者。
抗原-抗体的结合有前带后带的说法,aptamer似乎没有。
aptamer与靶标的结合,与aptamer是否被固定有关。固定化的aptamer,一定要注意手臂的设计。
很感谢,aptamer 与分析物结合前是不是一定要activation或是退火?还有注意离子强度,温度?ph值起什么作用呢? 多谢指点。固定化的aptamer 手臂是什么意思?是要加6个C吗
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个人感觉固定化的aptamer的手臂是为了降低位阻。。。aptamer在使用前变性是为了aptamer呈现链状而不是相互纠缠在一起。也可以说是为了增加aptamer与target的识别机会。至于离子强度,温度和pH值在一定程度上会影响aptamer的选择性和灵敏度,这个要靠实验优化,或者参考权威文献,个人觉得一般情况下和筛选这种aptamer的条件是类似的。
希望大家广泛留言提供宝贵意见,初次研究适配体与分析物相互作用,但就是抓不到,具体点正在用ATP的aptamer 捕获ATP,但是不知道哪个关键环节有问题,就是抓不到ATP!还请高手指点
实验体系的设计不同,条件有一些差别。某些文献的条件是不可信的。你是固定化检测,还是在均相检测?如果不担心泄密,可给出一些具体设计,这样能更有针对性。
固定在表面上进行检测,比如说我用 VEGF165 的 aptamer去抓 VEGF,很常见的一个反应,aptamer 抓分析物最主要的是什么?
适配体aptamer 与分析物有效结合的有效结合取决于它们之间本身的亲和性(例如解离常数或结合常数);以及所用的buffer 种类 pH 盐离子浓度等外部条件。
亲和性可以通过文献所报道的获得,像ATP与其DNA aptamer解离常数在微摩尔级,所以要想观察到明显的结合,ATP需要在毫摩尔级的浓度。VEGF与aptamer亲和性在100纳摩尔左右,VEGF的浓度可能要到微摩尔级了。此外,VEGF是蛋白质,需要防止其变性。
实验缓冲条件可以参考其原始文献,即楼上所提到的筛选条件。
如果aptamer是固定在表面上,可能还会在很大程度上减弱其与分析物的亲和性。影响的减弱在于连接臂的设计、在表面固定的密度等。