我打算使用醋酸锂转化酵母,但我查到的方法都有些出入,我想问一下,有没有人有很完整的醋酸锂转化法,包括各种试剂的配置。谢谢,很急,希望大家能帮帮忙! 返回小木虫查看更多
酵母转化 a.从平板上挑取单菌落,于20ml YPED液体培养基过夜培养。 b.将菌液转接至40ml YPED液体培养基中,使菌体浓度OD600为0.2—0.25,30℃振荡培养。 c.菌体浓度OD600为0.7—1.0时,离心收集菌体,并用无菌水离心洗涤,离心条件为3000rpm,5min。 d.将洗涤后的菌体转移至1.5ml离心管中,用1ml的100mmol/L LiAc离心洗涤,离心条件为13000rpm,15sec。 e.重悬细胞于400μl的100mmol/L LiAc中混匀,取50μl,13000rpm,15sec离心后,依次加入240μl 50% PEG6000,36μl 1mol/L LiAc,5μl 单链鱼精DNA,64μl 无菌重蒸水和6μl DNA片段混匀(空白样直接加70μl 无菌重蒸水)。 f.30℃保温30min后,42℃水浴中热激25min。 g.3000rpm,5min离心除去上清,重悬细胞于800μl YPED液体培养基中,培养2小时。 h.3000rpm,2min离心除去上清,重悬细胞于800μl 无菌重蒸水中,再同条件离心除去上清液,重悬细胞于500μl 无菌重蒸水中,取100μl涂布平板,30℃恒温培养3-4天,挑选转化子并验证,
所用的LiAc和PEG均是过滤除菌
去CLONTECH官网上,有双杂交手册下载,里面有详细的操作和试剂配置~ 自己动手丰衣足食~ 各个实验室的方法可能有点儿出入,不一定都完完全全一样的~
酵母转化
a.从平板上挑取单菌落,于20ml YPED液体培养基过夜培养。
b.将菌液转接至40ml YPED液体培养基中,使菌体浓度OD600为0.2—0.25,30℃振荡培养。
c.菌体浓度OD600为0.7—1.0时,离心收集菌体,并用无菌水离心洗涤,离心条件为3000rpm,5min。
d.将洗涤后的菌体转移至1.5ml离心管中,用1ml的100mmol/L LiAc离心洗涤,离心条件为13000rpm,15sec。
e.重悬细胞于400μl的100mmol/L LiAc中混匀,取50μl,13000rpm,15sec离心后,依次加入240μl 50% PEG6000,36μl 1mol/L LiAc,5μl 单链鱼精DNA,64μl 无菌重蒸水和6μl DNA片段混匀(空白样直接加70μl 无菌重蒸水)。
f.30℃保温30min后,42℃水浴中热激25min。
g.3000rpm,5min离心除去上清,重悬细胞于800μl YPED液体培养基中,培养2小时。
h.3000rpm,2min离心除去上清,重悬细胞于800μl 无菌重蒸水中,再同条件离心除去上清液,重悬细胞于500μl 无菌重蒸水中,取100μl涂布平板,30℃恒温培养3-4天,挑选转化子并验证,
所用的LiAc和PEG均是过滤除菌
去CLONTECH官网上,有双杂交手册下载,里面有详细的操作和试剂配置~
自己动手丰衣足食~ 各个实验室的方法可能有点儿出入,不一定都完完全全一样的~