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酵母的醋酸锂转化法
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| 我打算使用醋酸锂转化酵母，但我查到的方法都有些出入，我想问一下，有没有人有很完整的醋酸锂转化法，包括各种试剂的配置。谢谢，很急，希望大家能帮帮忙！ |
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alfred111
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酵母转化方法
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酵母转化 a.从平板上挑取单菌落，于20ml YPED液体培养基过夜培养。 b.将菌液转接至40ml YPED液体培养基中，使菌体浓度OD600为0.2—0.25，30℃振荡培养。 c.菌体浓度OD600为0.7—1.0时，离心收集菌体，并用无菌水离心洗涤，离心条件为3000rpm,5min。 d.将洗涤后的菌体转移至1.5ml离心管中，用1ml的100mmol/L LiAc离心洗涤，离心条件为13000rpm,15sec。 e.重悬细胞于400μl的100mmol/L LiAc中混匀，取50μl，13000rpm,15sec离心后，依次加入240μl 50% PEG6000，36μl 1mol/L LiAc，5μl 单链鱼精DNA，64μl 无菌重蒸水和6μl DNA片段混匀（空白样直接加70μl 无菌重蒸水）。 f.30℃保温30min后，42℃水浴中热激25min。 g.3000rpm,5min离心除去上清，重悬细胞于800μl YPED液体培养基中,培养2小时。 h.3000rpm,2min离心除去上清，重悬细胞于800μl 无菌重蒸水中，再同条件离心除去上清液，重悬细胞于500μl 无菌重蒸水中，取100μl涂布平板，30℃恒温培养3-4天，挑选转化子并验证。 |
2楼2008-03-16 17:11:43
alfred111
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