最近在纯化带有his标签的融合蛋白,用的是变性方法,现在的问题是纯化出来的蛋白经透析除掉8M尿素后,蛋白不溶于普通的PBS buffer,这样该如何测蛋白浓度?如何去打兔子制备抗体啊 返回小木虫查看更多
如果不复性的话只有用电泳来估计一下了
蛋白不溶于普通的PBS buffer是沉淀的意思么? 那样的话使蛋白浓度太高了。
蛋白没有复性
用尿素重新溶解后加入终浓度为千分之1的SDS,应该不会沉淀,然后透析到PBS,最后由BCA的方法测定蛋白浓度,蛋白溶液中的SDS不会影响免疫效果,
免疫的话直接用变性的免疫也可以啊,没必要透析除尿素的。
估计你是在变性之后没有复性吧,复性之后在溶解。
含有尿素的话会不会影响免疫的效果,兔子会不会死啊?
如果不复性的话只有用电泳来估计一下了
蛋白不溶于普通的PBS buffer是沉淀的意思么?
那样的话使蛋白浓度太高了。
蛋白没有复性
用尿素重新溶解后加入终浓度为千分之1的SDS,应该不会沉淀,然后透析到PBS,最后由BCA的方法测定蛋白浓度,蛋白溶液中的SDS不会影响免疫效果,
免疫的话直接用变性的免疫也可以啊,没必要透析除尿素的。
估计你是在变性之后没有复性吧,复性之后在溶解。
含有尿素的话会不会影响免疫的效果,兔子会不会死啊?