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双酶切获得目的片段

作者 greatsaint: 来源: 小木虫 750 15 举报帖子

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我现在将DNA片段连接到了载体上，现在想通过双酶切从载体上将正确的目的片段切下来做RFLP分析，酶是BamH1和Xho1。但是我不知道目的片段中有没有这两种酶的作用位点，该怎么办？双酶切是同时反应好还是分别单酶切好？返回小木虫查看更多

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精华评论

shensc727

不知道楼主知不知道你的目的基因的序列？？？要是知道，你可以用软件分析一下酶切位点就知道了！这样的软件很多，如：Dnaman, primer 5 等！
双酶切和分步酶切哪个效果好，要看你用哪两个酶组合！！！有的组合，这两种方法效果一样，有的组合分步酶切好，而有的是双酶切好！！！
双酶切时，主要看是不是有很好的公用buffer，如果没有，最好采用分步酶切！！！
祝你实验顺利！！！
695

楼上的解释很细致，严重同意
beisimai895

介意去查载体说明，看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点，而且，感觉奇怪的是，即然要酶切，为什么引物设计时不加酶切位点，或者是对载体了解不清晰，怎么会到了要切的时候，才去找有没有酶切位点。
liugang66

引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009-8-6 21:48:
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列？？？要是知道，你可以用软件分析一下酶切位点就知道了！这样的软件很多，如：Dnaman, primer 5 等！
双酶切和分步酶切哪个效果好，要看你用哪两个酶组合！！！有的组合， ...

学习了
greatsaint

引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009/8/7 08:11:
介意去查载体说明，看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点，而且，感觉奇怪的是，即然要酶切，为什么引物设计时不加酶切位点，或者是对载体了解不清晰，怎么会到了要切的时候，才去找有没有酶切位点。

我用的是克隆试剂盒，两侧的MCS都是知道的，有我上面说的那两个酶切位点。只是我现在怕目的片段中也有这两个酶的作用位点，若是这样再用此双酶切的话就得不到目的片段了。你说的有道理，可以在设计引物时加上酶切位点。不知道这样麻不麻烦
，
greatsaint

引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009/8/6 21:48:
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列？？？要是知道，你可以用软件分析一下酶切位点就知道了！这样的软件很多，如：Dnaman, primer 5 等！
双酶切和分步酶切哪个效果好，要看你用哪两个酶组合！！！有的组合， ...

谢谢帮助！
greatsaint

谢谢楼上的回答！