中间只有7个碱基。
可以切开 如果是双切了做载体的话，需要先切一下，然后回收，在切一下。（可以先用SCI1先切，然后用HIND3切）
4楼从热动力学分析很有道理 另补充几点 从酶本身的考虑：SacI和HindIII均属II型限切酶，酶识别反对称序列并结合于其上 进行切割，所以两个酶是否可以同时切割两个较接近的位点要看酶本身是否可结合 于这段序列，我们可以分析这两个酶的保护碱基数 HindIII：CCCAAGCTTGGG 酶切20h 切割率>75% SacI ：CGAGCTCG 酶切20h 切割率>10% 从楼主所给序列初步判断双切从距离上来说是没有问题的 从缓冲体系考虑： Sac I 为低盐缓冲体系，当盐浓度高于10 mM时，Sac I 的活性被抑制。 HindIII为中盐缓冲体系，低离子强度条件可能会导致星活性。 以NEB酶为例 可使用 NEBuffer 1 + BSA先进行切割1-2h（在此条件下酶切效率100%）， 再补HindIII（在此条件下酶切效率50%）进行切割 楼主可根据自己需要确定酶用粒�
楼上很厉害~~佩服！ 有没有兴趣加入交流群一起跟大家聊聊？31408667
两个酶切位点靠的有点近，双酶切效果可能不会很理想。 还是建议单个酶切，先切一个，然后再切另外一个，但是这样比较麻烦！ 为了双酶切得到比较好的效果，选择酶切位点的时候尽量间隔多些！ 根据我的实验经验，一般间隔4个酶切位点！ 祝你好运!
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可以切开
如果是双切了做载体的话，需要先切一下，然后回收，在切一下。（可以先用SCI1先切，然后用HIND3切）
4楼从热动力学分析很有道理
另补充几点
从酶本身的考虑：SacI和HindIII均属II型限切酶，酶识别反对称序列并结合于其上
进行切割，所以两个酶是否可以同时切割两个较接近的位点要看酶本身是否可结合
于这段序列，我们可以分析这两个酶的保护碱基数
HindIII：CCCAAGCTTGGG 酶切20h 切割率>75%
SacI ：CGAGCTCG 酶切20h 切割率>10%
从楼主所给序列初步判断双切从距离上来说是没有问题的
从缓冲体系考虑：
Sac I 为低盐缓冲体系，当盐浓度高于10 mM时，Sac I 的活性被抑制。
HindIII为中盐缓冲体系，低离子强度条件可能会导致星活性。
以NEB酶为例
可使用 NEBuffer 1 + BSA先进行切割1-2h（在此条件下酶切效率100%），
再补HindIII（在此条件下酶切效率50%）进行切割
楼主可根据自己需要确定酶用粒�
楼上很厉害~~佩服！
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两个酶切位点靠的有点近，双酶切效果可能不会很理想。
还是建议单个酶切，先切一个，然后再切另外一个，但是这样比较麻烦！
为了双酶切得到比较好的效果，选择酶切位点的时候尽量间隔多些！
根据我的实验经验，一般间隔4个酶切位点！
祝你好运!