老板让我养腺病毒,但是我不是学生物的,对这方面不太清楚。 之前上网和到图书馆查了好些资料但都没有结果。 有哪位朋友养过的麻烦教下我,谢谢 返回小木虫查看更多
腺病毒可以用293细胞作为宿主 ,一般的做法是先培养293细胞到一定的密度,然后按照一定的MOI接种腺病毒,继续培养,增值病毒,到一定时期收获病毒。
可否提供更加详细的培养方案?
大体思路知道,但具体操作方法不会
lz可以看点关于病毒在宿主细胞中增殖的方法,及细胞培养方法 那里有许多具体实验操作的详细方法!
用于扩增和包装腺病毒的应该是293A细胞,是293的一个突变株。感染病毒详细步骤: 1.293A细胞生长至70%左右汇合度,弃去培养基; 2.直径10cm培养皿加入5ml无血清DEME培养基(小心操作,293A细胞极易飘起); 3.向其中滴加一定滴度的病毒液(刚开始做可以滴加梯度),轻轻晃匀; 4.37度5%co2培养1小时;中途可再晃匀一次; 5.向培养皿中补加5ml含10%小牛血清的DMED培养基,轻轻晃匀; 6.再度至于培养箱中培养2-3天,原代病毒在293A细胞中大量复制并包装,3天左右细胞全部漂起; 7.离心收集细胞,用1mlPBS或无血清DMEM重悬细胞沉淀。 8.-80度~37度反复冻融3次,使病毒粒子释放。 9.5000rpm4度离心十分钟,收集上清即为扩增后的病毒液(无菌操作),可用于继续扩增病毒或用于实验! 以上为个人实验心的,你可以试一试。好的话请支持一下,半夜里一个字一个字敲进去的啊! :,
太感激了谢谢
腺病毒可以用293细胞作为宿主 ,一般的做法是先培养293细胞到一定的密度,然后按照一定的MOI接种腺病毒,继续培养,增值病毒,到一定时期收获病毒。
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那里有许多具体实验操作的详细方法!
用于扩增和包装腺病毒的应该是293A细胞,是293的一个突变株。感染病毒详细步骤:
1.293A细胞生长至70%左右汇合度,弃去培养基;
2.直径10cm培养皿加入5ml无血清DEME培养基(小心操作,293A细胞极易飘起);
3.向其中滴加一定滴度的病毒液(刚开始做可以滴加梯度),轻轻晃匀;
4.37度5%co2培养1小时;中途可再晃匀一次;
5.向培养皿中补加5ml含10%小牛血清的DMED培养基,轻轻晃匀;
6.再度至于培养箱中培养2-3天,原代病毒在293A细胞中大量复制并包装,3天左右细胞全部漂起;
7.离心收集细胞,用1mlPBS或无血清DMEM重悬细胞沉淀。
8.-80度~37度反复冻融3次,使病毒粒子释放。
9.5000rpm4度离心十分钟,收集上清即为扩增后的病毒液(无菌操作),可用于继续扩增病毒或用于实验!
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