克隆高ＧＣ含量的基因
请教各位师兄师姐，怎样克隆高ＧＣ含量的基因，比如克隆链霉菌的基因，如果不用专用的Ｔａｑ酶和Ｂｕｆｆｅｒ。我试过在反应体系中加不同浓度的ＤＭＳＯ和甘油，都没有结果，请问大家有其他好的建议吗？
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克隆高GC含量的模板，难度比较大。主要是在PCR过程中，你可以在PCR的BUFFER中加入几种PCR增强剂，预变性10分钟后在加入聚合酶。如果是长片段，建议你在基因中间选择合适的DNA内切酶位点进行分段扩增和克隆。
这位老兄的论点是有依据的。我曾经看到过一篇文献，介绍用甜菜碱作为添加剂，扩增高GC含量的片断。但是当年我没有发现哪个公司卖这个。楼主可以试试。
[ Last edited by killjap on 2007-7-20 at 21:43 ]
，
用ｐｈｕｓｉｏｎ酶，有高ＧＣ专用ｂｕｆｆｅｒ．
还没碰到有Ｐ不出来的序列。
有的公司的GC buffer还没DMSO好用呢