Sample Text [ Last edited by johnsooh on 2007-6-16 at 10:22 ] 返回小木虫查看更多
先离心,然后用ddH2O溶解。引物合成报告单上有一项“1 OD=0.0048(比如)”,如果给你的是每管1 OD,就加48μl水溶解,使用时再稀释10倍就可以了。
溶解引物: 首先需要离心,然后慢慢打开管盖,溶解时请加需要量的水后盖上盖子, 上下充分震荡10min 1. Oligo DNA是以OD260单位来计算的,这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位,根据此定义,1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA,您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量,计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。 2. 引物序列的分子量计算公式如下: MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61 例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG A=1 C=3 G=11 T=6 MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=6541 3. Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算:Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。 例:您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA 分子量=20×324.5=6490 质量数=5×33=165μg 摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol 若加灭菌双蒸水400μl溶解,则浓度为25nmol/400μl=62.5μM 4. 装有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,临用前稀释。 5. 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心10,000rpm,1min,然后再慢慢打开管盖。 6. 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水,盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟,再次离心10,000rpm,1min。 7. 计算原引物管primer的浓度(必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确)。 8. 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。 9. 标明原引物管、应用引物管、稀释方法,置-20℃保存。,
离心后加入报告单上的说明配成100ppmol 用时稀释少量10ppmol
1OD的一般你加200ul灭菌水,50ul体系,你加2ul,25ul你加1ul就行了,尽信书不如无书,我原来就是严格按照书上说的来设计引物呀,其实没必要,经验也很重要,科学也是重要的,关键是如何具体问题具体利用,
楼上的说法我不赞同哈,你说的可能是一般长度的引物咯。我的引物就很长,有40或60 多bp的,每次合成了就只能加很少的水,和我17,20bp的差异很大呀!
先离心,然后用ddH2O溶解。引物合成报告单上有一项“1 OD=0.0048(比如)”,如果给你的是每管1 OD,就加48μl水溶解,使用时再稀释10倍就可以了。
溶解引物:
首先需要离心,然后慢慢打开管盖,溶解时请加需要量的水后盖上盖子, 上下充分震荡10min
1. Oligo DNA是以OD260单位来计算的,这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位,根据此定义,1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA,您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量,计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。
2. 引物序列的分子量计算公式如下:
MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61
例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG A=1 C=3 G=11 T=6
MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=6541
3. Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算:Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。
例:您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA
分子量=20×324.5=6490
质量数=5×33=165μg
摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol
若加灭菌双蒸水400μl溶解,则浓度为25nmol/400μl=62.5μM
4. 装有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,临用前稀释。
5. 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心10,000rpm,1min,然后再慢慢打开管盖。
6. 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水,盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟,再次离心10,000rpm,1min。
7. 计算原引物管primer的浓度(必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确)。
8. 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。
9. 标明原引物管、应用引物管、稀释方法,置-20℃保存。,
离心后加入报告单上的说明配成100ppmol
用时稀释少量10ppmol
1OD的一般你加200ul灭菌水,50ul体系,你加2ul,25ul你加1ul就行了,尽信书不如无书,我原来就是严格按照书上说的来设计引物呀,其实没必要,经验也很重要,科学也是重要的,关键是如何具体问题具体利用,
楼上的说法我不赞同哈,你说的可能是一般长度的引物咯。我的引物就很长,有40或60 多bp的,每次合成了就只能加很少的水,和我17,20bp的差异很大呀!