当前位置: 首页 > 生物科学 >[求助]怎样溶解引物 引物如何稀释?

[求助]怎样溶解引物 引物如何稀释?

作者 zhangjie801284
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
+关注

Sample Text

[ Last edited by johnsooh on 2007-6-16 at 10:22 ] 返回小木虫查看更多

今日热帖
  • 精华评论
  • phyllislhy

    先离心,然后用ddH2O溶解。引物合成报告单上有一项“1 OD=0.0048(比如)”,如果给你的是每管1 OD,就加48μl水溶解,使用时再稀释10倍就可以了。

  • johnsooh

    溶解引物:

    首先需要离心,然后慢慢打开管盖,溶解时请加需要量的水后盖上盖子, 上下充分震荡10min
    1. Oligo DNA是以OD260单位来计算的,这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位,根据此定义,1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA,您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量,计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。

    2. 引物序列的分子量计算公式如下:

    MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61

    例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG   A=1  C=3  G=11  T=6

    MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=6541

    3. Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算:Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。

    例:您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA

    分子量=20×324.5=6490

    质量数=5×33=165μg

    摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol

    若加灭菌双蒸水400μl溶解,则浓度为25nmol/400μl=62.5μM

    4. 装有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,临用前稀释。

    5. 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心10,000rpm,1min,然后再慢慢打开管盖。

    6. 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水,盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟,再次离心10,000rpm,1min。

    7. 计算原引物管primer的浓度(必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确)。

    8. 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。

    9. 标明原引物管、应用引物管、稀释方法,置-20℃保存。

  • 黑罕

    离心后加入报告单上的说明配成100ppmol
    用时稀释少量10ppmol

  • wjg_1979

    1OD的一般你加200ul灭菌水,50ul体系,你加2ul,25ul你加1ul就行了,尽信书不如无书,我原来就是严格按照书上说的来设计引物呀,其实没必要,经验也很重要,科学也是重要的,关键是如何具体问题具体利用,

  • 松虱

    楼上的说法我不赞同哈,你说的可能是一般长度的引物咯。我的引物就很长,有40或60 多bp的,每次合成了就只能加很少的水,和我17,20bp的差异很大呀!

猜你喜欢
下载小木虫APP
与700万科研达人随时交流
  • 二维码
  • IOS
  • 安卓