| 查看: 818 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
zhangjie801284木虫 (正式写手)
c
|
[交流]
[求助]怎样溶解引物 引物如何稀释？
|
||
|
">Sample Text [ Last edited by johnsooh on 2007-6-16 at 10:22 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
专硕310求调剂
已经有5人回复
-
081700化学工程与技术 一志愿中海洋 323 求调剂学校
已经有14人回复
-
085600，321分求调剂
已经有5人回复
-
一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂
已经有3人回复
-
一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂
已经有9人回复
-
工科11408，314求调剂，有项目经验，了解transformer，能训练模型。
已经有3人回复
-
348分环境工程·调剂
已经有11人回复
-
359求调剂
已经有3人回复
-
0703求调剂
已经有6人回复
-
一志愿0817化学工程与技术，求调剂
已经有26人回复
phyllislhy
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2070.6
- 红花: 2
- 帖子: 411
- 在线: 64.3小时
- 虫号: 105582
- 注册: 2005-11-16
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
2楼2007-06-11 12:06:57
johnsooh
荣誉版主 (正式写手)
此用户来自小木虫总部信号不好
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 0.8
- 金币: 2053.6
- 帖子: 465
- 在线: 3.5小时
- 虫号: 256819
- 注册: 2006-06-03
- 性别: GG
- 专业: 分子生物学
- 管辖: 生物科学
★
plantsoil(金币+1):thx
plantsoil(金币+1):thx
|
溶解引物: 首先需要离心,然后慢慢打开管盖,溶解时请加需要量的水后盖上盖子, 上下充分震荡10min 1． Oligo DNA是以OD260单位来计算的，这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位，根据此定义，1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA，您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量，计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。 2． 引物序列的分子量计算公式如下： MW=（A碱基数×312）+（C碱基数×288）+（G碱基数×328）+（T碱基数×303）-61 例如：引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG A=1 C=3 G=11 T=6 MW=（1×312）+（3×328）+（6×303）-61=6541 3． Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算：Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5，则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。 例：您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA 分子量=20×324.5=6490 质量数=5×33=165μg 摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol 若加灭菌双蒸水400μl溶解，则浓度为25nmol/400μl=62.5μM 4． 装有引物的eppendorf管一般保存于-20℃，临用前稀释。 5． 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管子前请先离心10,000rpm，1min，然后再慢慢打开管盖。 6． 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水，盖上管盖，充分上下振荡5-10分钟，再次离心10,000rpm，1min。 7． 计算原引物管primer的浓度（必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确）。 8． 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。 9． 标明原引物管、应用引物管、稀释方法，置-20℃保存。 |
3楼2007-06-11 12:08:13
4楼2007-06-11 19:46:49
5楼2007-06-12 22:28:14
6楼2007-06-15 16:41:37
