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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 一个挑3个单克隆测序，测序结果有个别碱基变化怎么办
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hxy123456789

新虫 (初入文坛)

[求助] 一个挑3个单克隆测序，测序结果有个别碱基变化怎么办 已有3人参与

一个挑3个单克隆测序，测序结果有个别碱基变化怎么办 @biostar2009

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1楼 2016-02-21 20:56:27
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jackyoung

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-21 22:27:00
看看有木有规律，以及出现的频率，确认你括增的时候用的是否高保真酶，确定是不是自发或自然突变。

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CestLaVie
2楼2016-02-21 21:25:19
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T.gondii

铁虫 (小有名气)
主要看测序峰图，如果峰值高，说明测序正确，你的序列有突变……

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3楼2016-02-21 22:03:03
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huajunwux

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-02-21 22:27:22
1. 如楼上所说，先看变化碱基处的测序峰图。有的时候机器读取的序列可能会有偏差，峰图是最可信赖的。
2. 不同组织或者细胞系可能会有个别碱基的突变。分析你的碱基变化是否可导致氨基酸变化，如果氨基酸还是一样的，那你用这个克隆是没有问题的。
3. 用高保真酶。
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4楼2016-02-21 22:16:16
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sunlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以上uniprot 看看这些突变是不是自己造成的，还是自然界本身存在的；如果是自然界本身就存在，不用管它。如果是自己pcr突变引起的，看看其是否在该基因的功能区，如果不是可忽略不计，一般都没问题、
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很给力
5楼2016-02-23 08:29:22
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看一下测序峰怎么样，是不是测序出现一点问题，一般来说突变的几率稍小一点
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6楼2016-02-25 16:49:11
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