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关于单克隆和单基因型
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各位好，有个问题困扰我好久了，最近构建了一个工程菌，是将野生型菌株的一个启动子片段，连入T载体，再用同源重组的方法整合进野生型菌株基因组上的另一个位置，然后挑选阳性克隆测序验证。 但是纠结的是我对阳性克隆的插入片段进行PCR测序后，发现有套峰，于是T-A克隆后再测序，发现10个克隆子中多数有3个位点突变，与克隆前测序套峰的位置一致（见图片中红色框标注），少数没有突变。因此认为是菌不纯，没跳到单克隆，然后将菌株稀释划线，又挑了很多单克隆测序，均发现有套峰，也就是一直没有得到基因型单一（或者都突变，或者都不突变）的菌株，这是为什么呢？ 难道单克隆菌落在复制时不同细胞之间的基因组拷贝间也会有碱基差异吗？单克隆就一定是单基因型吗？ 望有经验的大侠能多多指点~~~不胜感激~~~已经做了2个多月了，再没结果实在没法交代了  注：我用的是不动杆菌菌株。  测序峰图 |
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