| 查看: 255 | 回复: 0 | ||
[求助]
构另一个单倍型的重组质粒 一直构不好
|
|
我有一个质粒一直构不出来。它的另一个单倍型质粒已经构好。 外源目的片段有500bp。用的载体是pGL3-promoter ,酶切位点是 xho1和kpn1。 酶切反应： Buffer: 5ul PCR product/ pGL3-promoter 5000ng kpn1 5ul xho1 5ul 水补足到50ul。 酶切后的 pGL3-promoter进行sap处理 。跑胶回收后酶连，22度，过夜。酶连时，外源目的片段与载体的摩尔比是4：1。 用的酶都是thermo的。但是挑的单克隆都是空载体 做了不下五次 ，扩目的片段的引物也重新设计过一次,也换过酶切位点，都是空载体。扩的目的片段，我送去测序，没问题，载体也是切开的。最让人费解的是它的另一个单倍型我一次就构好了，两个单倍型有15个snp位点，我设计的酶切位点和引物是避开了这15个snp位点的。目的片段就是连不进去 请高手赐教 ！ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
