| 查看: 3696 | 回复: 17 | |||
[求助]
DH5a大肠杆菌感受态细胞 已有6人参与
|
|||
|
DH5a大肠杆菌感受态细胞 CaCl2法总是做失败， 两次过夜活化实验室保存的菌株，取3ml活化好的菌液加入300ml新鲜LB液体培养基中，摇菌3小时左右，分装50ml一管，冰浴10min,4℃，6000rpm离心10min,弃上清，用6ml 0.1mol/L cacl2-mgcl2重悬, 冰浴10min,4℃，6000rpm离心10min,弃上清，再用0.4ml 0.1mol/L cacl2重悬,0.06ml无菌甘油，使之终浓度为15%，分装为0.01ml小管， -70℃保存。 使用了6支自制的感受态，加入连接产物转化后，离心发现沉淀挺多，涂板前发现混匀的菌液是乳白色，过夜培养总是长出成片的块斑，怀疑是制作感受态失败，求解答～谢谢  发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有8人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 4片段装配 共18kb转化大肠杆菌不长菌落，求助各位！！
已经有0人回复
- 急求！大容量载体与片段连接问题
已经有5人回复
- 大肠杆菌DH5a感受态制备的问题
已经有0人回复
- 感受态转化及阳性克隆出现问题
已经有15人回复
- 重组载体转化农杆菌，目的片段小了什么原因？
已经有1人回复
- TA克隆，假阳性？假阴性？
已经有16人回复
- ITS 构建克隆文库
已经有3人回复
- 大肠杆菌感受态DH5a和DB3.1的区别
已经有1人回复
- 大肠杆菌转化
已经有12人回复
- DH5a感受态细胞制备问题
已经有16人回复
- 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点
已经有55人回复
- DH5a 感受态细胞制备问题
已经有17人回复
- 大肠杆菌DH5a作感受态，PMD-19T载体连接重组的问题
已经有3人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 大肠杆菌DH5a和XL1-Blue之间如何区分
已经有3人回复
- pMG36e 构建的奇怪现象
已经有29人回复
- 感受态的制备及转化？
已经有13人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】做大肠杆菌DH5a感受态，枪头什么的都要酸泡吗？
已经有5人回复
- 【求助/交流】怎么判断质粒的大小
已经有3人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌感受态污染问题
已经有21人回复
jiangronglu
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 10517.3
- 散金: 104
- 红花: 9
- 帖子: 2924
- 在线: 332小时
- 虫号: 1793748
- 注册: 2012-05-03
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
此现象存在以下问题，1:感受态做的太好了，或者说转化率太高，可以取部分转化菌液涂板。2.有没有用液氮速冻后放于70度冰箱，这样更好。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2015-11-30 15:00:05
2楼2015-11-30 14:50:20
4楼2015-12-03 00:03:18
5楼2015-12-03 08:46:28
6楼2015-12-03 09:07:22
7楼2015-12-05 14:25:56
8楼2015-12-05 14:26:13
2013092429
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 589.5
- 散金: 158
- 帖子: 415
- 在线: 70.7小时
- 虫号: 4146392
- 注册: 2015-10-15
- 性别: MM
- 专业: 无机材料化学
9楼2015-12-05 14:30:31
10楼2015-12-05 14:45:21
