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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » DH5a大肠杆菌感受态细胞
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吕稀稀子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuuri208 at 2015-12-05 14:45:21
制备好的感受态有做正负对照吗？
就是转1 ng对照质粒和空白对照涂到对应抗性的板上那种。

没有坐过 会继续努力 谢谢你的解答

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11楼2015-12-07 00:34:11
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yuuri208

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 吕稀稀子 at 2015-12-07 00:34:11
没有坐过 会继续努力 谢谢你的解答
...

在做感受态不熟练、对自己技术没信心的时候，最好正负对照都做。后面技术好了，只做负对照就可以了。加油吧！

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12楼2015-12-07 22:59:34
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厚德求是

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

别纠结了，先不转质粒涂到带抗性的板子上，看看是不是污染了。正常的话，就是制备出了问题。你买个商用试剂盒，专门做感受态的试剂盒，照着说明书做，应该问题不大。不要纠结于这些细枝末节的东西，省了一点点经费，耽误了大把时间。

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13楼2015-12-07 23:08:44
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Davan2464

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yspain at 2015-12-03 08:46:28
不是目测，要在一定的OD值之内才行

OD值大概是多少？我看的是0.35--0.4左右，也有说是0.6的

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14楼2016-04-18 16:30:25
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傻曦

新虫 (初入文坛)
可以目测   3个小时太久了已经过掉了  OD值偏高了  前面步骤相同  但摇菌摇最多2个小时  一个半小时的时候检查一下 培养基拿起来摇一下看到培养基半混浊半澄清状态即可  后面的离心6000转5分钟即可  用CaCl2和甘油的混合液洗一次  离心6000转10分钟  倒掉上清液 再用混合液重悬分装  我一直是这么做的

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15楼2016-05-26 09:18:03
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这不能说明是感受态的问题，是你涂板技术有问题或抗生素是假的，板子根本没涂干，没有单菌落，涂到感觉有阻力的时候就可以了，一般不要用刚倒好的平板，在超净工作台吹一会然后放到冰箱过夜，再涂比较容易。还有就是涂之前要先离心，留下100ul左右吹打混匀，然后涂板。
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16楼2016-05-30 11:14:10
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庄事骎

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhuec at 2015-12-03 09:07:22
个人觉得可以直接将感受态涂在抗性板上看看制备的感受态怎样。另外看转化效率可以先用质粒做转化试一下效率。

没质粒的感受态涂布抗性平板长得了吗？
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17楼2017-04-16 14:29:54
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smile瑛

新虫 (初入文坛)
你的问题解决了吗？

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18楼2017-11-20 09:46:58
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