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DH5a大肠杆菌感受态细胞已有6人参与
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DH5a大肠杆菌感受态细胞 CaCl2法总是做失败， 两次过夜活化实验室保存的菌株，取3ml活化好的菌液加入300ml新鲜LB液体培养基中，摇菌3小时左右，分装50ml一管，冰浴10min,4℃，6000rpm离心10min,弃上清，用6ml 0.1mol/L cacl2-mgcl2重悬, 冰浴10min,4℃，6000rpm离心10min,弃上清，再用0.4ml 0.1mol/L cacl2重悬,0.06ml无菌甘油，使之终浓度为15%，分装为0.01ml小管， -70℃保存。 使用了6支自制的感受态，加入连接产物转化后，离心发现沉淀挺多，涂板前发现混匀的菌液是乳白色，过夜培养总是长出成片的块斑，怀疑是制作感受态失败，求解答～谢谢  发自小木虫Android客户端 |
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可以目测 3个小时太久了已经过掉了 OD值偏高了 前面步骤相同 但摇菌摇最多2个小时 一个半小时的时候检查一下 培养基拿起来摇一下看到培养基半混浊半澄清状态即可 后面的离心6000转5分钟即可 用CaCl2和甘油的混合液洗一次 离心6000转10分钟 倒掉上清液 再用混合液重悬分装 我一直是这么做的 发自小木虫IOS客户端 |
15楼2016-05-26 09:18:03
2楼2015-11-30 14:50:20
jiangronglu
铁杆木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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此现象存在以下问题，1:感受态做的太好了，或者说转化率太高，可以取部分转化菌液涂板。2.有没有用液氮速冻后放于70度冰箱，这样更好。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2015-11-30 15:00:05
4楼2015-12-03 00:03:18