| 查看: 875 | 回复: 3 | ||
老夏853铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
ITS 构建克隆文库
|
|
小弟最近遇见一件怪事。。。 从某种样品中使用its1f 和its4r 扩增到 its 序列后 ，拟构建文库，PCR产物割胶的时候条带正常，亮度不弱。没有什么异常现象。但是克隆后在平板上长相也正常 ， 做PCR 验证的时候却阳性率很低 ，四个样品分别挑八个 也就只有四个是阳性的。。。 按理说这个很简单 ，试过好几次了 都这样。烦死了块。。。 ITS 序列 在大肠杆菌质粒中表达 应该不存在什么问题吧 ，也有阳性存在，说明不是检验PCR的问题。。 这么简单一个事情 拖了一个月了 擦 。 都觉得被人质疑能力了。，。 请有经验的 帮忙指点一二。。 感受态细胞 用的是bl21 ，原来一直用DH5a 的 最近一段没了，就是有个师妹做表达 的感受态 借来用 不知道是不是这个原因。 但是 其他的样品一切正常啊 难道是这组样品的问题？ 在核酸水平上序列差异应该不是问题吧？ 抑郁了都。 [ Last edited by 老夏853 on 2013-7-19 at 14:04 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
304求调剂
已经有3人回复
-
材料专硕306英一数二
已经有3人回复
-
0703化学调剂
已经有3人回复
-
环境工程调剂
已经有3人回复
-
283求调剂
已经有10人回复
-
290求调剂
已经有10人回复
-
321求调剂
已经有4人回复
-
326求调剂
已经有5人回复
-
东南大学364求调剂
已经有4人回复
-
085600材料与化工 求调剂
已经有13人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 已有基因组文库，求目的基因全序列的克隆子
已经有6人回复
- 请教：16S RDNA克隆文库与宏基因组测序的区别？
已经有5人回复
- Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
已经有18人回复
- fosmide克隆文库
已经有8人回复
- 如何运用克隆文库法分析土壤真菌微生物多样性？
已经有8人回复
- 克隆文库中的操作分类单元和Rarefaction analysis
已经有21人回复
- 克隆文库相关问题
已经有4人回复
- 与16S克隆文库有关的问题
已经有3人回复
2楼2013-08-06 14:02:37
肥猫p
木虫 (正式写手)
- 应助: 94 (初中生)
- 金币: 2763.1
- 散金: 145
- 红花: 10
- 帖子: 340
- 在线: 189.3小时
- 虫号: 1709733
- 注册: 2012-03-22
- 专业: 微生物资源与分类学
3楼2013-08-06 18:41:46
老夏853
铁杆木虫 (著名写手)
- MicEPI: 2
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 5944.8
- 散金: 1705
- 红花: 17
- 帖子: 2076
- 在线: 1230.6小时
- 虫号: 463482
- 注册: 2007-11-20
- 专业: 食品加工技术
4楼2013-08-06 21:40:09
