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老夏853铁杆木虫 (著名写手)
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[求助]
ITS 构建克隆文库
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小弟最近遇见一件怪事。。。 从某种样品中使用its1f 和its4r 扩增到 its 序列后 ，拟构建文库，PCR产物割胶的时候条带正常，亮度不弱。没有什么异常现象。但是克隆后在平板上长相也正常 ， 做PCR 验证的时候却阳性率很低 ，四个样品分别挑八个 也就只有四个是阳性的。。。 按理说这个很简单 ，试过好几次了 都这样。烦死了块。。。 ITS 序列 在大肠杆菌质粒中表达 应该不存在什么问题吧 ，也有阳性存在，说明不是检验PCR的问题。。 这么简单一个事情 拖了一个月了 擦 。 都觉得被人质疑能力了。，。 请有经验的 帮忙指点一二。。 感受态细胞 用的是bl21 ，原来一直用DH5a 的 最近一段没了，就是有个师妹做表达 的感受态 借来用 不知道是不是这个原因。 但是 其他的样品一切正常啊 难道是这组样品的问题？ 在核酸水平上序列差异应该不是问题吧？ 抑郁了都。 [ Last edited by 老夏853 on 2013-7-19 at 14:04 ] |
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