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luke951

新虫 (小有名气)

[求助] C18液相色谱柱污染求助已有2人参与

用C18液相色谱柱分离苯乙酮和1-苯乙醇,开始用的时候出的峰都没问题,进浓度稍高(0.77mg/mL)的样后峰形开始拖尾,这过程中还试了内标物苯甲酸、本甲醇、甲苯。峰拖尾是里面有残留的物质没洗出来吗?如果是该怎么洗才能洗出来呢?我是液相菜鸟,望各位大神帮忙出出招,很急,谢谢!

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易雨清风

金虫 (小有名气)

★ ★
xl_pro: 金币+2, 感谢你的应助,辛苦了! 2015-11-21 11:04:04
有可能是预柱饱和,也就是说没有了分离作用,建议先用异丙醇冲洗预柱,再过度到甲醇冲洗,然后再多洗洗柱子,再进样试试

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2楼2015-11-21 00:49:32
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huangdong712

禁虫 (文坛精英)

本帖内容被屏蔽

10楼2015-11-21 12:44:19
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
luke951: 金币+4, 有帮助 2015-11-21 13:54:54
C18 柱本身可以用二氯甲烷洗,但必须必须用纯的异丙醇低速平衡很久以后。如果没有平衡好,还有残留的水相,就会出现分相,柱子就真的毁了。你可以搜一下安捷伦色谱柱冲洗液的配方,是THF-DCM-IPA-ACN-hexane的混合液,效果不错的。

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14楼2015-11-21 13:25:02
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xuyingemail

新虫 (小有名气)

峰拖尾不一定是柱子不干净,有可能是你的色谱条件不合适或者色谱柱不合适。还有你进的浓度是否太大了,把浓度降低看是否还有拖尾。然后再决定下一步操作。
20楼2015-11-23 11:21:09
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普通回帖

四季豆将

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
luke951: 金币+2, 有帮助 2015-11-21 13:02:21
根据你的样品,要不你用PH7~8的90%水相低流速冲,或用纯的甲醇异丙醇,95%的乙腈冲,或以纯的二氯甲烷每针100Ul进几针样,几分钟一针,看看能带出东西不,有资料说二氯甲烷可以活化柱子,我没敢用过,进样是种折中方法,你胆子大的话可以二氯甲烷冲冲柱子

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3楼2015-11-21 07:53:41
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luke951

新虫 (小有名气)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 易雨清风 at 2015-11-21 00:49:32
有可能是预柱饱和,也就是说没有了分离作用,建议先用异丙醇冲洗预柱,再过度到甲醇冲洗,然后再多洗洗柱子,再进样试试

我没有装预柱的,柱子用乙腈梯度洗脱洗了半天了,还是不行。

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4楼2015-11-21 09:07:20
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luke951

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 四季豆将 at 2015-11-21 07:53:41
根据你的样品,要不你用PH7~8的90%水相低流速冲,或用纯的甲醇异丙醇,95%的乙腈冲,或以纯的二氯甲烷每针100Ul进几针样,几分钟一针,看看能带出东西不,有资料说二氯甲烷可以活化柱子,我没敢用过,进样是种折中 ...

我也不敢,C18的柱子能用异丙醇洗吗?

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5楼2015-11-21 09:09:52
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易雨清风

金虫 (小有名气)

可以用异丙醇洗柱子,但异丙醇粘度大,单独用它洗柱子,柱压会很高,建议用异丙醇醇,水,乙腈,0.1%甲酸水和25%混合溶液洗柱子,还有千万别用二氯甲烷,不然你柱子就毁了。如果可以的话,最好加个预柱。

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6楼2015-11-21 09:57:44
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huangdong712

禁虫 (文坛精英)

本帖内容被屏蔽

7楼2015-11-21 10:15:36
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luke951

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 易雨清风 at 2015-11-21 09:57:44
可以用异丙醇洗柱子,但异丙醇粘度大,单独用它洗柱子,柱压会很高,建议用异丙醇醇,水,乙腈,0.1%甲酸水和25%混合溶液洗柱子,还有千万别用二氯甲烷,不然你柱子就毁了。如果可以的话,最好加个预柱。
...

是异丙醇、水、乙腈、甲酸混在一起洗吗?他们的比例分别是多少呢?

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8楼2015-11-21 11:46:49
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luke951

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by huangdong712 at 2015-11-21 10:15:36
用蒸馏水,甲醇,异丙醇大量洗,是不是买来的新柱子,没有洗干净,就是大量洗,没有别的办法。

新柱子不到一个月

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9楼2015-11-21 11:47:23
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