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quanweizhuce木虫 (小有名气)
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[交流]
质粒转化的结果鉴定
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最近在做质粒转化实验，第一次接触有很多不懂的地方，几个问题想请教大家。 背景： 将新霉素抗性的质粒转入金黄色葡萄球菌内。抽提的质粒与新制备的金葡菌感受态细胞进行电转化，结束后将菌液涂布新霉素抗性平板内，37℃培养4天后，只有一块平板长出2个菌落  ，经观察两个菌落是金葡菌。问题： 在论坛看了其他虫友关于质粒转化的评论，“抗生素的活性只能维持一段时间，常见的氨苄青霉素（Amp）在37℃大约能维持16小时（也就是过夜），时间太长后就失效了。一般抗生素只能抑制杂菌生长，并不能杀死它们，所以抗生素失效之后，杂菌就能长起来了。” 金葡菌通常涂板24小时肯定能长出来，可是我转化后涂板很久才长出两个菌落，时间是明显延长的，请问，新霉素的抗性也是只能维持一段时间吗？大约多久？ |
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我做的不是金葡，也可能你的感受态细胞不太好或者电转条件不对，这方面你看相关文献就好了，或者你质粒浓度不对，我看你质粒是从金葡里提出来的，质粒浓度测过了没？为什么不用大肠杆菌扩增质粒啊？ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2015-11-01 11:59:31
2楼2015-10-30 16:55:35
3楼2015-10-30 21:28:55
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你是怎么转化到金葡里面的？电转？我用过氨苄 氯霉素 卡那霉素和红霉素的筛选，一般转化成功的五到六个小时都能长出来，最多过夜也长出来了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-10-31 22:34:08