| 查看: 2001 | 回复: 10 | |||
quanweizhuce木虫 (小有名气)
|
[交流]
质粒转化的结果鉴定
|
||
最近在做质粒转化实验，第一次接触有很多不懂的地方，几个问题想请教大家。 背景： 将新霉素抗性的质粒转入金黄色葡萄球菌内。抽提的质粒与新制备的金葡菌感受态细胞进行电转化，结束后将菌液涂布新霉素抗性平板内，37℃培养4天后，只有一块平板长出2个菌落  ，经观察两个菌落是金葡菌。问题： 在论坛看了其他虫友关于质粒转化的评论，“抗生素的活性只能维持一段时间，常见的氨苄青霉素（Amp）在37℃大约能维持16小时（也就是过夜），时间太长后就失效了。一般抗生素只能抑制杂菌生长，并不能杀死它们，所以抗生素失效之后，杂菌就能长起来了。” 金葡菌通常涂板24小时肯定能长出来，可是我转化后涂板很久才长出两个菌落，时间是明显延长的，请问，新霉素的抗性也是只能维持一段时间吗？大约多久？ |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿沪9，326求生物学调剂
已经有7人回复
-
化工学硕294分，求导师收留
已经有24人回复
-
085600材料与化工329分求调剂
已经有10人回复
-
284求调剂
已经有10人回复
-
复试调剂
已经有18人回复
-
310求调剂
已经有16人回复
-
274求调剂
已经有7人回复
-
245求调剂
已经有7人回复
-
有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子
已经有11人回复
-
290求调剂
已经有15人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 毕赤酵母重组转化子pcr鉴定问题
已经有3人回复
- 毕赤酵母在筛选板上长的很好，但是PCR鉴定不出来是怎么回事？
已经有21人回复
- 菌液PCR鉴定阳性，双酶切无结果。
已经有2人回复
- 连接克隆载体提取质粒结果跑出两条带
已经有11人回复
- 质粒酶切后没有条带了。。。。
已经有12人回复
- 连接转化质粒变小~有人遇到这种情况吗
已经有5人回复
- 关于pET32a载体构建后，双酶切鉴定不正确~求助
已经有10人回复
- 我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
已经有51人回复
- 大肠杆菌转化
已经有12人回复
- 目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
已经有11人回复
- 中草药生物技术-唐克轩
已经有133人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 我将1质粒连在BK载体上，但是阳性克隆鉴定一直是阴性，什么原因呢
已经有6人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 连接转化进大肠杆菌BL21
已经有6人回复
- 克隆过程出现的问题
已经有7人回复
- 连接转化后鉴定大小不对，求帮助！！！
已经有4人回复
- 求助啊！转质粒出现问题了！
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒的不相容性
已经有7人回复
- 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】质粒提取遇到了问题
已经有2人回复
2楼2015-10-30 16:55:35
3楼2015-10-30 21:28:55
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
你是怎么转化到金葡里面的？电转？我用过氨苄 氯霉素 卡那霉素和红霉素的筛选，一般转化成功的五到六个小时都能长出来，最多过夜也长出来了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-10-31 22:34:08
quanweizhuce
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1927.1
- 散金: 224
- 红花: 4
- 帖子: 265
- 在线: 169.3小时
- 虫号: 898117
- 注册: 2009-11-09
- 专业: 黏膜免疫学
5楼2015-11-01 09:03:09
quanweizhuce
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1927.1
- 散金: 224
- 红花: 4
- 帖子: 265
- 在线: 169.3小时
- 虫号: 898117
- 注册: 2009-11-09
- 专业: 黏膜免疫学
6楼2015-11-01 09:03:18
quanweizhuce
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1927.1
- 散金: 224
- 红花: 4
- 帖子: 265
- 在线: 169.3小时
- 虫号: 898117
- 注册: 2009-11-09
- 专业: 黏膜免疫学
7楼2015-11-01 09:05:17
8楼2015-11-01 10:31:37
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我做的不是金葡，也可能你的感受态细胞不太好或者电转条件不对，这方面你看相关文献就好了，或者你质粒浓度不对，我看你质粒是从金葡里提出来的，质粒浓度测过了没？为什么不用大肠杆菌扩增质粒啊？ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2015-11-01 11:59:31
danahi
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 16.4
- 帖子: 8
- 在线: 4.6小时
- 虫号: 2592968
- 注册: 2013-08-12
- 性别: MM
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
10楼2015-12-22 15:31:18
20