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tianti_121

新虫 (小有名气)

[求助] 测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗? 已有6人参与

我有好几处测序5‘端和3’端都会与设计的引物序列不一样,是测序结果不准确呢,还是真的PCR的问题呢?

附图大家帮忙给看看。起始密码子是ATG,结果却是CAT?终止密码子TAA,测序结果却是AAA?这到底是怎么一回事?不解中!

谢谢大家!

测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗?
终止密码子部位.png


测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗?-1
起始密码子部位.png
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sunshine436

新虫 (小有名气)

遇到这种情况,要看峰图上读的是什么,另外你的测序引物设计的要离目的基因远一点,要不然读的不准确。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-22 17:57:25
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厚德求是

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看看公司发给你的那个峰图,而不是这个生成的文本,你去看看对应的位点峰图乱不乱,如果很乱可能就是测序出了问题。

发自小木虫IOS客户端
8楼2015-10-23 08:12:47
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徐小培

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般前后都不准确,尤其是后面800bp以后,都有可能不正确,但是最好结合峰图来判断。
9楼2015-10-23 09:10:01
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普通回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是连载体测序还是直接PCR产物测序?
3楼2015-10-22 20:34:05
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tianti_121

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2015-10-22 20:34:05
是连载体测序还是直接PCR产物测序?

连载体测序,puc19,目的基因大概1500左右,使用通用引物M17测序
4楼2015-10-22 23:00:11
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by tianti_121 at 2015-10-22 23:00:11
连载体测序,puc19,目的基因大概1500左右,使用通用引物M17测序...

你的引物就在起始密码子和终止密码子吗?如果是这样,你测的又都是这两个位置有问题,那我觉得是引物合成出错了。
5楼2015-10-22 23:48:34
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从你的图看,前面也没有多少了,应该是测序引物太近了,一般从测序开始有几十个是不准的!

发自小木虫Android客户端
相信黎明不会失约,相信付出必有回报!
6楼2015-10-23 00:13:25
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tolobio

新虫 (小有名气)


重点看峰图。
7楼2015-10-23 06:42:44
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

八百以内直接看可以,超过八百两端可能不准,有疑问看峰图,多数情况下不会出错。大片段测序尽量双向测通。使用通用引物测序,目的基因两侧应该不会有大问题吧

发自小木虫Android客户端
10楼2015-10-24 00:28:43
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