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tianti_121

新虫 (小有名气)

[求助] 测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗? 已有6人参与

我有好几处测序5‘端和3’端都会与设计的引物序列不一样,是测序结果不准确呢,还是真的PCR的问题呢?

附图大家帮忙给看看。起始密码子是ATG,结果却是CAT?终止密码子TAA,测序结果却是AAA?这到底是怎么一回事?不解中!

谢谢大家!

测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗?
终止密码子部位.png


测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗?-1
起始密码子部位.png
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tianti_121

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2015-10-22 20:34:05
是连载体测序还是直接PCR产物测序?

连载体测序,puc19,目的基因大概1500左右,使用通用引物M17测序
4楼2015-10-22 23:00:11
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查看全部 12 个回答

sunshine436

新虫 (小有名气)

遇到这种情况,要看峰图上读的是什么,另外你的测序引物设计的要离目的基因远一点,要不然读的不准确。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-22 17:57:25
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是连载体测序还是直接PCR产物测序?
3楼2015-10-22 20:34:05
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by tianti_121 at 2015-10-22 23:00:11
连载体测序,puc19,目的基因大概1500左右,使用通用引物M17测序...

你的引物就在起始密码子和终止密码子吗?如果是这样,你测的又都是这两个位置有问题,那我觉得是引物合成出错了。
5楼2015-10-22 23:48:34
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