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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 我的蛋白电泳怎么了？？？抓狂中。。。。。。
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小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 我的蛋白电泳怎么了？？？抓狂中。。。。。。 已有10人参与

从昨天开始配置的15%SDS-page，5%浓缩胶，上样后电泳就出现了这个样子的怪状！maker在积层胶就早早的分离也压不成一条线，其余的蛋白貌似压成一条线后换120V电压。溴酚蓝呼呼跑，但是marker 就在分离胶的上层不往下走，等溴酚蓝已经跑到底时 它还是在那  染色脱色后蛋白门也都在那 现在真是奇怪啊，抓狂。。。。怎么就突然这样了呢！！！！！！！！！！！！附图正在电泳着的样子！！！

我的蛋白电泳怎么了？？？抓狂中。。。。。。
IMG20150916151546.jpg
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简简单单才是真
1楼 2015-09-16 15:30:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

夏雨天的你

新虫 (正式写手)
胶的问题，M都跑步下来，重新配胶

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7楼2015-09-16 16:38:24
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夏雨天的你

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 夏雨天的你 at 2015-09-15 20:38:24
胶的问题，M都跑步下来，重新配胶

改变一下思维，这肯定胶的问题，问题可能多方面不太好找到，这样你就重新配制那几个成分，再配胶，估计不会有问题了，这可能比你找到原因还要节省时间

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23楼2015-09-17 12:52:11
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
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25楼2015-09-17 17:10:56
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郭冠霖

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-16 20:12:07
你连蛋白分子量都没说。。。问你电泳的技术支持。问他们你这种蛋白要用多少浓度的胶。然后你确定MAKER的浓度。你看颜色搞毛。看MAKER

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2楼2015-09-16 15:39:40
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-16 20:12:21
小橘子2013: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-09-21 17:03:45
确认下浓缩胶和分离胶的各种组分，浓度、pH等
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3楼2015-09-16 15:46:41
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 郭冠霖 at 2015-09-16 15:39:40
你连蛋白分子量都没说。。。问你电泳的技术支持。问他们你这种蛋白要用多少浓度的胶。然后你确定MAKER的浓度。你看颜色搞毛。看MAKER

marker是14-100KD 一共七条带   我的目的蛋白是18KD左右  之前一直用的15%的分离胶 最后一条浅黄的的14KD marker 会一直跟着溴酚蓝往下跑的  现在是14KD的marker都不往下走  你知道这会是什么原因吗？
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简简单单才是真
4楼2015-09-16 16:27:53
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a86052 at 2015-09-16 15:46:41
确认下浓缩胶和分离胶的各种组分，浓度、pH等

今天让实验室的师姐用10%的分离胶跑过我的marker  结果还是很好的  每条带都跑的很开  我们都是用一样的东西  现在不知道问题在哪？ 我今天还让溴酚蓝跑出胶板 看到maker的最后一条带（14KD）依然不动   我都无语了。。。。你看你又什么好建议吗？
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简简单单才是真
5楼2015-09-16 16:31:10
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-16 20:12:31
小橘子2013: 金币+1, ★有帮助 2015-09-21 17:04:12
marker加点上样缓冲液试试，混合和保持各个孔上样量一致
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6楼2015-09-16 16:38:22
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-09-16 16:31:10
今天让实验室的师姐用10%的分离胶跑过我的marker  结果还是很好的  每条带都跑的很开  我们都是用一样的东西  现在不知道问题在哪？ 我今天还让溴酚蓝跑出胶板 看到maker的最后一条带（14KD）依然不动   我都无语了 ...

看到你的电泳槽内有两个气泡界面，是分别内、外槽液液面高度吗？如果是，感觉你的内槽液太少了点
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8楼2015-09-16 17:01:54
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郭冠霖

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-09-16 16:27:53
marker是14-100KD 一共七条带   我的目的蛋白是18KD左右  之前一直用的15%的分离胶 最后一条浅黄的的14KD marker 会一直跟着溴酚蓝往下跑的  现在是14KD的marker都不往下走  你知道这会是什么原因吗？...

话说。。。我都说了。你问你这个电泳机子的技术支持会告诉你胶要多少浓度的所以就不用那么麻烦。按他们说的做再看情况

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9楼2015-09-16 17:55:53
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 郭冠霖 at 2015-09-16 17:55:53
话说。。。我都说了。你问你这个电泳机子的技术支持会告诉你胶要多少浓度的所以就不用那么麻烦。按他们说的做再看情况
...

技术支持真忙
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10楼2015-09-16 21:33:01
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