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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 我的蛋白电泳怎么了？？？抓狂中。。。。。。
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小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 我的蛋白电泳怎么了？？？抓狂中。。。。。。已有10人参与

从昨天开始配置的15%SDS-page，5%浓缩胶，上样后电泳就出现了这个样子的怪状！maker在积层胶就早早的分离也压不成一条线，其余的蛋白貌似压成一条线后换120V电压。溴酚蓝呼呼跑，但是marker 就在分离胶的上层不往下走，等溴酚蓝已经跑到底时 它还是在那  染色脱色后蛋白门也都在那 现在真是奇怪啊，抓狂。。。。怎么就突然这样了呢！！！！！！！！！！！！附图正在电泳着的样子！！！

我的蛋白电泳怎么了？？？抓狂中。。。。。。
IMG20150916151546.jpg
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简简单单才是真
1楼2015-09-16 15:30:50
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 郭冠霖 at 2015-09-16 15:39:40
你连蛋白分子量都没说。。。问你电泳的技术支持。问他们你这种蛋白要用多少浓度的胶。然后你确定MAKER的浓度。你看颜色搞毛。看MAKER

marker是14-100KD 一共七条带   我的目的蛋白是18KD左右  之前一直用的15%的分离胶 最后一条浅黄的的14KD marker 会一直跟着溴酚蓝往下跑的  现在是14KD的marker都不往下走  你知道这会是什么原因吗？
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简简单单才是真
4楼2015-09-16 16:27:53
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by a86052 at 2015-09-16 15:46:41
确认下浓缩胶和分离胶的各种组分，浓度、pH等

今天让实验室的师姐用10%的分离胶跑过我的marker  结果还是很好的  每条带都跑的很开  我们都是用一样的东西  现在不知道问题在哪？ 我今天还让溴酚蓝跑出胶板 看到maker的最后一条带（14KD）依然不动   我都无语了。。。。你看你又什么好建议吗？
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简简单单才是真
5楼2015-09-16 16:31:10
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-16 21:33:32
若这样说，请确认你没有把上下胶配反~...

我确定没有！

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简简单单才是真
15楼2015-09-17 12:22:04
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-09-16 16:38:22
marker加点上样缓冲液试试，混合和保持各个孔上样量一致

Marker加上样缓冲液，为了验证什么呢？？我的marker让同天跑10%的胶带了一次，还是能分开的。

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简简单单才是真
16楼2015-09-17 12:23:58
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by turnaward at 2015-09-17 08:34:48
个人觉得PH反了

可是别人用为什么能行，我只要跑15%的胶就这样，昨天接着跑了个12%的胶，稍微往下了一点，但是没到底部。

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简简单单才是真
17楼2015-09-17 12:25:06
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by 关包子 at 2015-09-16 21:59:46
ph 问题，你的tris hcl 8.8，6.8检查一下，我也遇到这个问题

哦哦，好的，下午我去测一下！

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简简单单才是真
18楼2015-09-17 12:25:37
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 夏雨天的你 at 2015-09-16 16:38:24
胶的问题，M都跑步下来，重新配胶

我已经配了好多次了，就跟我作对似的，之前都是这样配的没有问题呀，突然就这样了。。吓死了。。

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简简单单才是真
19楼2015-09-17 12:27:30
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by a86052 at 2015-09-16 17:01:54
看到你的电泳槽内有两个气泡界面，是分别内、外槽液液面高度吗？如果是，感觉你的内槽液太少了点...

那个气泡是外面的。里面的正常。

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简简单单才是真
20楼2015-09-17 12:28:26
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
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22楼: Originally posted by 夏雨天的你 at 2015-09-17 12:48:13
把用的那些配方重新配制，再配胶
...

恩  昨天把Tris-hcl都重新配了下  在试试吧  谢谢
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简简单单才是真
27楼2015-09-18 11:03:06
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