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amio7o

新虫 (初入文坛)

[求助] Sephadex G75 凝胶过滤蛋白纯化蛋白分不开怎么办呀? 已有1人参与

发酵液中含有我要的凝乳酶,想要纯化出来。但Sephadex G75 凝胶柱一直出问题。

用离子交换柱洗脱收集的样品超滤除盐浓缩后上样,只有1个峰,电泳分析,蛋白条带和上样前一样!

直接用过粗酶液上样也是这样,只有1个峰,蛋白没有进入到凝胶结构中去。完全分不开啊。

柱材料没问题啊,师兄上样就分出来了(我跟他的样品不一样)

怀疑问题出在我的样品上,我是发酵液2次硫酸铵沉淀,然后透析脱盐,聚乙二醇2万浓缩的

哪位高手知道问题可能出现在哪里及怎么解决啊?!
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花雨渡飞仙

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.更换其它填料;
2.优化洗脱条件。
2楼2014-04-21 09:21:10
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amio7o

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 花雨渡飞仙 at 2014-04-21 09:21:10
1.更换其它填料;
2.优化洗脱条件。

我的蛋白分子量只能用g75啊,G50太小,G100太大,洗脱条件怎么优化?Sephadex纯化分离跟洗脱液关系不大吧
3楼2014-04-24 13:06:35
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