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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » Sephadex G75 凝胶过滤蛋白纯化蛋白分不开怎么办呀？
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amio7o

新虫 (初入文坛)

[求助] Sephadex G75 凝胶过滤蛋白纯化蛋白分不开怎么办呀？ 已有1人参与

发酵液中含有我要的凝乳酶，想要纯化出来。但Sephadex G75 凝胶柱一直出问题。
、
用离子交换柱洗脱收集的样品超滤除盐浓缩后上样，只有1个峰，电泳分析，蛋白条带和上样前一样！

直接用过粗酶液上样也是这样，只有1个峰，蛋白没有进入到凝胶结构中去。完全分不开啊。

柱材料没问题啊，师兄上样就分出来了（我跟他的样品不一样）

怀疑问题出在我的样品上，我是发酵液2次硫酸铵沉淀，然后透析脱盐，聚乙二醇2万浓缩的

哪位高手知道问题可能出现在哪里及怎么解决啊？！
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1楼 2014-04-19 19:23:16
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花雨渡飞仙

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.更换其它填料；
2.优化洗脱条件。
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2楼2014-04-21 09:21:10
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amio7o

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 花雨渡飞仙 at 2014-04-21 09:21:10
1.更换其它填料；
2.优化洗脱条件。

我的蛋白分子量只能用g75啊，G50太小，G100太大，洗脱条件怎么优化？Sephadex纯化分离跟洗脱液关系不大吧
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3楼2014-04-24 13:06:35
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