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xiazheng

新虫 (初入文坛)

[求助] 谁对SDSPAGE比较在行???? 已有3人参与

我这几天在做SDSPAGE电泳,虽然,样品蛋白没有跑出条带,但是,我还能把标准蛋白跑出条带;可是这几次为什么跑不出来标准单白条带了??是试剂的PH变化了?还是怎么了???
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)
二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的
三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是共轭双键的吸收波长,很多物质都会有吸收,如果做亲和层析时咪唑也有吸收,RNA在280下也有吸收,可能你测得的是RNA?
    那么你的蛋白质Marker有没有显示条带?
2楼2015-04-26 14:40:55
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xiazheng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2015-04-26 14:40:55
一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)
二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的
三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是共轭双键的吸收波长, ...

缓冲液用了十多天了,是在4℃冰箱放着的。Marker前几次都显示条带了,可是在后边的几次中,不显示了。
3楼2015-04-26 17:58:09
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lha123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议再做一遍,所有的东西用新配置的,不需要花时间去找原因的
加油!2015
4楼2015-04-28 17:30:33
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

跑不出来条带是指什么?是指白版一块还是能染出泳道?
如果你的样品没有问题,那就从制胶试剂入手,最好能够说一下你的蛋白表达条件,并来张图分析一下。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
5楼2015-05-12 15:11:54
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