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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 谁对SDSPAGE比较在行？？？？
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xiazheng

新虫 (初入文坛)

[求助] 谁对SDSPAGE比较在行？？？？ 已有3人参与

我这几天在做SDSPAGE电泳，虽然，样品蛋白没有跑出条带，但是，我还能把标准蛋白跑出条带；可是这几次为什么跑不出来标准单白条带了？？是试剂的PH变化了？还是怎么了？？？
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1楼 2015-04-26 14:09:45
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一：上样缓冲液，用分子克隆上的配方做一次试试看（你所用的缓冲液是不是很久了？）
二：如果你染色，脱色都没有问题，PAGE胶是不会说谎的
三：不知道你是在哪种波长下所测得有数值？280nm是共轭双键的吸收波长，很多物质都会有吸收，如果做亲和层析时咪唑也有吸收，RNA在280下也有吸收，可能你测得的是RNA？
    那么你的蛋白质Marker有没有显示条带？
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2楼2015-04-26 14:40:55
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xiazheng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2015-04-26 14:40:55
一：上样缓冲液，用分子克隆上的配方做一次试试看（你所用的缓冲液是不是很久了？）
二：如果你染色，脱色都没有问题，PAGE胶是不会说谎的
三：不知道你是在哪种波长下所测得有数值？280nm是共轭双键的吸收波长， ...

缓冲液用了十多天了，是在4℃冰箱放着的。Marker前几次都显示条带了，可是在后边的几次中，不显示了。
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3楼2015-04-26 17:58:09
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lha123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议再做一遍，所有的东西用新配置的，不需要花时间去找原因的
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加油！2015
4楼2015-04-28 17:30:33
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

跑不出来条带是指什么？是指白版一块还是能染出泳道？
如果你的样品没有问题，那就从制胶试剂入手，最好能够说一下你的蛋白表达条件，并来张图分析一下。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
5楼2015-05-12 15:11:54
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