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胡程

银虫 (小有名气)

[交流] 为啥跑sdspage,做蛋白样品的时候,样品有粘稠物?求高手指教 已有2人参与

最近用BL21表达一个蛋白,本人一般取菌液1.5到2.5ml之间,加150到250的pbs和对应的5×buffer,100度10min,12000转10min,有沉淀,但吸取上清的时候总有一坨粘稠物,但是上清却很清,根本看不到粘稠物。上样之后也总感觉在孔里沉淀的很慢。以前做样的时候不是这样的,最近总是这样。
还有我最近做的时候,刚开始总是没有沉淀,只有粘稠物,后来我发现降级loading buffer的浓度(我是把它当成6×的来用),煮沸离心之后就有沉淀了,但是粘稠物还是在,就是我第一段描述的问题了。
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做最好的自己
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胡程

银虫 (小有名气)

求关注,求帮忙
做最好的自己
2楼2015-01-17 14:30:11
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ptttmt

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬????太少了!!!我们通常是1ml菌液加150pbs重悬,再加150的2*loading buffer煮样!!另外,按你那比例制样,跑胶应该挺难跑的,样品在压缩胶很难压成一条细线,而且跑出来的胶应该也不会好看。
3楼2015-01-17 18:53:41
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aotoulan

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼2015-01-18 09:33:08
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胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:53:41
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬????太少了!!!我们通常是1ml菌液加150pbs重悬,再加150的2*loading buffer煮样!!另外,按你那比例制样,跑胶应该挺难跑的,样品在压缩胶很难压成一条细线,而且跑出来 ...

我试试,谢谢了
做最好的自己
5楼2015-01-18 12:11:44
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