24小时热门版块排行榜    

查看: 1758  |  回复: 4

胡程

银虫 (小有名气)

[交流] 为啥跑sdspage,做蛋白样品的时候,样品有粘稠物?求高手指教 已有2人参与

最近用BL21表达一个蛋白,本人一般取菌液1.5到2.5ml之间,加150到250的pbs和对应的5×buffer,100度10min,12000转10min,有沉淀,但吸取上清的时候总有一坨粘稠物,但是上清却很清,根本看不到粘稠物。上样之后也总感觉在孔里沉淀的很慢。以前做样的时候不是这样的,最近总是这样。
还有我最近做的时候,刚开始总是没有沉淀,只有粘稠物,后来我发现降级loading buffer的浓度(我是把它当成6×的来用),煮沸离心之后就有沉淀了,但是粘稠物还是在,就是我第一段描述的问题了。
回复此楼
做最好的自己
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)

求关注,求帮忙
做最好的自己
2楼2015-01-17 14:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬????太少了!!!我们通常是1ml菌液加150pbs重悬,再加150的2*loading buffer煮样!!另外,按你那比例制样,跑胶应该挺难跑的,样品在压缩胶很难压成一条细线,而且跑出来的胶应该也不会好看。
3楼2015-01-17 18:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aotoulan

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2015-01-18 09:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:53:41
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬????太少了!!!我们通常是1ml菌液加150pbs重悬,再加150的2*loading buffer煮样!!另外,按你那比例制样,跑胶应该挺难跑的,样品在压缩胶很难压成一条细线,而且跑出来 ...

我试试,谢谢了
做最好的自己
5楼2015-01-18 12:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡程 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见