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胡程

银虫 (小有名气)

[交流] 为啥跑sdspage，做蛋白样品的时候，样品有粘稠物？求高手指教 已有2人参与

最近用BL21表达一个蛋白，本人一般取菌液1.5到2.5ml之间，加150到250的pbs和对应的5×buffer，100度10min，12000转10min，有沉淀，但吸取上清的时候总有一坨粘稠物，但是上清却很清，根本看不到粘稠物。上样之后也总感觉在孔里沉淀的很慢。以前做样的时候不是这样的，最近总是这样。
还有我最近做的时候，刚开始总是没有沉淀，只有粘稠物，后来我发现降级loading buffer的浓度（我是把它当成6×的来用），煮沸离心之后就有沉淀了，但是粘稠物还是在，就是我第一段描述的问题了。
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做最好的自己
1楼 2015-01-16 20:12:19
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ptttmt

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬？？？？太少了！！！我们通常是1ml菌液加150pbs重悬，再加150的2*loading buffer煮样！！另外，按你那比例制样，跑胶应该挺难跑的，样品在压缩胶很难压成一条细线，而且跑出来的胶应该也不会好看。
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3楼2015-01-17 18:53:41
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aotoulan

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
4楼2015-01-18 09:33:08
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胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:53:41
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬？？？？太少了！！！我们通常是1ml菌液加150pbs重悬，再加150的2*loading buffer煮样！！另外，按你那比例制样，跑胶应该挺难跑的，样品在压缩胶很难压成一条细线，而且跑出来 ...

我试试，谢谢了
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做最好的自己
5楼2015-01-18 12:11:44
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