24小时热门版块排行榜    

查看: 1981  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

胡程

银虫 (小有名气)

[交流] 为啥跑sdspage,做蛋白样品的时候,样品有粘稠物?求高手指教 已有2人参与

最近用BL21表达一个蛋白,本人一般取菌液1.5到2.5ml之间,加150到250的pbs和对应的5×buffer,100度10min,12000转10min,有沉淀,但吸取上清的时候总有一坨粘稠物,但是上清却很清,根本看不到粘稠物。上样之后也总感觉在孔里沉淀的很慢。以前做样的时候不是这样的,最近总是这样。
还有我最近做的时候,刚开始总是没有沉淀,只有粘稠物,后来我发现降级loading buffer的浓度(我是把它当成6×的来用),煮沸离心之后就有沉淀了,但是粘稠物还是在,就是我第一段描述的问题了。
回复此楼
做最好的自己
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬????太少了!!!我们通常是1ml菌液加150pbs重悬,再加150的2*loading buffer煮样!!另外,按你那比例制样,跑胶应该挺难跑的,样品在压缩胶很难压成一条细线,而且跑出来的胶应该也不会好看。
3楼2015-01-17 18:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

aotoulan

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2015-01-18 09:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:53:41
BL21诱导菌1.5ml菌液才用150ul pbs重悬????太少了!!!我们通常是1ml菌液加150pbs重悬,再加150的2*loading buffer煮样!!另外,按你那比例制样,跑胶应该挺难跑的,样品在压缩胶很难压成一条细线,而且跑出来 ...

我试试,谢谢了
做最好的自己
5楼2015-01-18 12:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +5 布布和一二 2026-08-08 8/400 2026-08-08 14:54 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见