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aaa6239

木虫 (小有名气)

[求助] 微生物功能基因敲除技术 已有3人参与

本人研究一个细菌的功能基因。
想通过基因敲除后再看菌株的有关功能,继而推断该基因的重要性。
打听到许多生物公司可以做,但考虑到经费,只能自己做。
有现成的试剂(盒)购买吗?大概多少钱?
请做过的虫友支招,
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aaa6239

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by biosci at 2015-07-07 21:38:08
敲除不难啊,首先找一种抗性,就是构建敲除盒子,然后电转化,筛阳性克隆就是
...

大致的步骤我看了文献有一定的了解,但能否适应我这菌就难说了。
除了主要的实验步骤,其余还要考虑些什么因素?
7楼2015-07-08 14:59:49
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
自己克隆个启动子,装上抗性基因和同源臂,然后电转化,筛选即可
2楼2015-07-07 11:07:22
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
现在成熟的有自杀质粒系统、RED重组系统、TALEN、CRISPR/Cas9系统等等,价格不会便宜的,个人感觉如果之前没有基因敲除经验,还不如交给公司去做……
3楼2015-07-07 16:51:16
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aaa6239

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lifechuteng at 2015-07-07 16:51:16
现在成熟的有自杀质粒系统、RED重组系统、TALEN、CRISPR/Cas9系统等等,价格不会便宜的,个人感觉如果之前没有基因敲除经验,还不如交给公司去做……

现在是写项目,必须要设计得能做出来。如果用red系统能买到全套质粒吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-07-07 21:03:36
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