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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 微生物功能基因敲除技术
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aaa6239

木虫 (小有名气)

[求助] 微生物功能基因敲除技术 已有3人参与

本人研究一个细菌的功能基因。
想通过基因敲除后再看菌株的有关功能，继而推断该基因的重要性。
打听到许多生物公司可以做，但考虑到经费，只能自己做。
有现成的试剂（盒）购买吗？大概多少钱？
请做过的虫友支招，
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1楼 2015-07-06 18:02:02
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己克隆个启动子，装上抗性基因和同源臂，然后电转化，筛选即可
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2楼2015-07-07 11:07:22
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
现在成熟的有自杀质粒系统、RED重组系统、TALEN、CRISPR/Cas9系统等等，价格不会便宜的，个人感觉如果之前没有基因敲除经验，还不如交给公司去做……
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3楼2015-07-07 16:51:16
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aaa6239

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lifechuteng at 2015-07-07 16:51:16
现在成熟的有自杀质粒系统、RED重组系统、TALEN、CRISPR/Cas9系统等等，价格不会便宜的，个人感觉如果之前没有基因敲除经验，还不如交给公司去做……

现在是写项目，必须要设计得能做出来。如果用red系统能买到全套质粒吗？

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4楼2015-07-07 21:03:36
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aaa6239

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-07-07 11:07:22
自己克隆个启动子，装上抗性基因和同源臂，然后电转化，筛选即可

我看文献里有个别是自己设计质粒的，对没做过的人来说有难哦！请问你自己做过吗？

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5楼2015-07-07 21:05:37
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
引用回帖:
5楼: Originally posted by aaa6239 at 2015-07-07 21:05:37
我看文献里有个别是自己设计质粒的，对没做过的人来说有难哦！请问你自己做过吗？
...

敲除不难啊，首先找一种抗性，就是构建敲除盒子，然后电转化，筛阳性克隆就是

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6楼2015-07-07 21:38:08
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aaa6239

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biosci at 2015-07-07 21:38:08
敲除不难啊，首先找一种抗性，就是构建敲除盒子，然后电转化，筛阳性克隆就是
...

大致的步骤我看了文献有一定的了解，但能否适应我这菌就难说了。
除了主要的实验步骤，其余还要考虑些什么因素？
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7楼2015-07-08 14:59:49
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by aaa6239 at 2015-07-07 21:03:36
现在是写项目，必须要设计得能做出来。如果用red系统能买到全套质粒吗？
...

RED我只查到这里有http://www.biovector.net/
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8楼2015-07-08 15:53:29
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by lifechuteng at 2015-07-08 15:53:29
RED我只查到这里有http://www.biovector.net/...

Biovector是骗子公司，假质粒还卖10000多一个

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9楼2015-07-08 16:17:26
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
你什么菌？一般大肠杆菌能有现成的敲除试剂盒。有一些菌可以用red系统，很多人都有。有些菌只能自杀载体。写信问别人要质粒好了。一般都会给。现在的公司很少愿意做细菌基因敲除的，真核酵母老鼠钱多

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10楼2015-07-08 20:01:42
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