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放线菌提取DNA做PCR一直做不好 已有4人参与
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从提取DNA开始就困难重重，我把我的方法写下来，请各位大神指正 第一次：用液氮研磨放线菌，剩余量很少，安上海生工的真菌试剂盒（他们没有放线菌试剂盒，推荐的真菌试剂盒）的步骤来做，电泳检测直接没有，有一个也是可能DNA降解了。 第二次：直接加溶菌酶，200微升Buffer体积加100微升100mg/ml的溶菌酶，37℃水浴3/4个小时，后面加蛋白酶K56摄氏度水浴2h 第三次：微波处理1min，后面步骤都一样，结果都扩散了 我查文献人家都用50v或80v电压，大概1.5h跑完，但我有查到电泳时间太长也会时DNA降解，为了让时间缩短，用了180v,150mA,25min跑完。是不是这个原因使DNA降解了？若我改成80v电压，电流改成多大好呢？还有说有很多放线菌可能会有DNA硫修饰，这样在跑胶点时候，就会发生弥散状，到底是怎么回事呢？ |
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