应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 放线菌提取DNA做PCR一直做不好
51/1返回列表
查看: 3741  |  回复: 9
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

薇_薇^_^

铁虫 (初入文坛)

[求助] 放线菌提取DNA做PCR一直做不好已有4人参与

从提取DNA开始就困难重重，我把我的方法写下来，请各位大神指正
  第一次：用液氮研磨放线菌，剩余量很少，安上海生工的真菌试剂盒（他们没有放线菌试剂盒，推荐的真菌试剂盒）的步骤来做，电泳检测直接没有，有一个也是可能DNA降解了。
第二次：直接加溶菌酶，200微升Buffer体积加100微升100mg/ml的溶菌酶，37℃水浴3/4个小时，后面加蛋白酶K56摄氏度水浴2h
第三次：微波处理1min，后面步骤都一样，结果都扩散了
我查文献人家都用50v或80v电压，大概1.5h跑完，但我有查到电泳时间太长也会时DNA降解，为了让时间缩短，用了180v,150mA,25min跑完。是不是这个原因使DNA降解了？若我改成80v电压，电流改成多大好呢？还有说有很多放线菌可能会有DNA硫修饰，这样在跑胶点时候，就会发生弥散状，到底是怎么回事呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2015-07-04 10:54:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LXTlxt001

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shmilying at 2015-07-04 18:00:30
呼我，告诉你个秘方。。。

我也是PCR的时候用的27F和1492R的通用引物但是有的能P出来，有的P不出来

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-01-19 23:09:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
溶菌酶过夜处理，提的好好的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-04 14:58:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shmilying

铁杆木虫 (著名写手)
呼我，告诉你个秘方。。。
赞一下(1人) 回复此楼
何处是我的岸
3楼2015-07-04 18:00:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzh109

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室使用OMEGA的细菌基因组提取试剂盒提取放线菌的基因组，效果很好，你可以试一下。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2015-07-05 11:09:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭