| 查看: 3827 | 回复: 9 | ||
[求助]
放线菌提取DNA做PCR一直做不好 已有4人参与
|
|
从提取DNA开始就困难重重，我把我的方法写下来，请各位大神指正 第一次：用液氮研磨放线菌，剩余量很少，安上海生工的真菌试剂盒（他们没有放线菌试剂盒，推荐的真菌试剂盒）的步骤来做，电泳检测直接没有，有一个也是可能DNA降解了。 第二次：直接加溶菌酶，200微升Buffer体积加100微升100mg/ml的溶菌酶，37℃水浴3/4个小时，后面加蛋白酶K56摄氏度水浴2h 第三次：微波处理1min，后面步骤都一样，结果都扩散了 我查文献人家都用50v或80v电压，大概1.5h跑完，但我有查到电泳时间太长也会时DNA降解，为了让时间缩短，用了180v,150mA,25min跑完。是不是这个原因使DNA降解了？若我改成80v电压，电流改成多大好呢？还有说有很多放线菌可能会有DNA硫修饰，这样在跑胶点时候，就会发生弥散状，到底是怎么回事呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有237人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用ITS4/5通用引物，对提取的DNA进行PCR，出现多条带是什么原因？
已经有3人回复
- nifH基因的定量PCR问题
已经有9人回复
- 全血DNA提取量少。
已经有4人回复
- 求助土壤总DNA提取和16S rDNA扩增
已经有15人回复
- 微生物液氮冻融法DNA提取
已经有8人回复
- 放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正
已经有19人回复
- 提取细菌基因组DNA时总是会有蛋白残留
已经有10人回复
- 提取DNA后，PCR电泳无条带
已经有5人回复
- 绝对定量荧光PCR中做标准曲线的DNA的获得。
已经有10人回复
- 急！PCR产物测序找不到引物
已经有17人回复
- 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
已经有19人回复
- 大家来说说做southern blot时，基因组DNA的提取方法
已经有39人回复
- 试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。
已经有10人回复
- 关于提取DNA的纯度对后续PCR的影响
已经有7人回复
- 【交流/求助】基因组DNA保存
已经有10人回复
- 请问大家做PCR-DGGE的时候 真菌细菌放线菌 分别用什么引物？ O(∩_∩)O谢谢
已经有13人回复
- 细菌全基因组提取求助
已经有7人回复
- 【求助/交流】提取的DNA在-20℃下保存后，怎样解冻？
已经有31人回复
- 【求助/交流】DNA提取方法（用于PCR-DGGE）
已经有20人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
2楼2015-07-04 14:58:20
shmilying
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 6213.6
- 散金: 36
- 红花: 2
- 帖子: 2282
- 在线: 1024.3小时
- 虫号: 773008
- 注册: 2009-05-17
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
3楼2015-07-04 18:00:30
wzh109
木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2944.6
- 散金: 1
- 帖子: 1288
- 在线: 292.3小时
- 虫号: 839831
- 注册: 2009-09-03
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2015-07-05 11:09:58
5楼2015-07-05 16:59:30
6楼2016-01-19 23:09:22
7楼2018-04-15 19:18:36
8楼2018-11-09 10:46:42
9楼2020-12-07 19:21:57
10楼2020-12-08 09:39:33
