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jinshengfang

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠发酵问题 已有2人参与

高手们,我的重组大肠杆菌摇瓶发酵时出现比较奇怪的现象。
1,9瓶平行,接种9瓶,4小时后,1瓶不长,其余8瓶生长
2,将8瓶诱导,诱导时测OD,均在1.0左右。
3,25度诱导过夜,第二天发现这8瓶都没怎么生长,OD都在1.2左右。
这是怎么回事了,培养基配方之前都用过,没问题,发酵完测OD在7左右。
请大侠们指教!
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生物催化
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3306549

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jinshengfang: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-04 14:08:07
用什么诱导的?
过夜的时候上摇床了吗?
2楼2015-07-02 10:35:07
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jinshengfang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 3306549 at 2015-07-02 10:35:07
用什么诱导的?
过夜的时候上摇床了吗?

用IPTG诱导,过夜诱导上摇床
生物催化
3楼2015-07-02 10:57:04
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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jinshengfang: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-04 14:08:12
IPTG浓度没搞错的话,估计只有重新做一遍了,这种情况以前应该很少出现。
青春留不住,白发自然生!
4楼2015-07-02 12:59:22
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jinshengfang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2015-07-02 12:59:22
IPTG浓度没搞错的话,估计只有重新做一遍了,这种情况以前应该很少出现。

其实这已经是第二次做了,我估计应该是种子有问题。休眠,老化,或者说表达的蛋白对细胞有害。活的东西就是问题多多呀
生物催化
5楼2015-07-02 14:10:37
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3306549

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jinshengfang at 2015-07-02 10:57:04
用IPTG诱导,过夜诱导上摇床...

那这样,你让菌多长长,不上摇床18个小时。然后诱导上摇床试试。
6楼2015-07-02 22:53:41
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jinshengfang at 2015-07-02 14:10:37
其实这已经是第二次做了,我估计应该是种子有问题。休眠,老化,或者说表达的蛋白对细胞有害。活的东西就是问题多多呀...

哦,那估计需要选育一下了,是外源表达的话,质粒丢失或者拷贝数下降,估计都会这样;或者活化最原始的重组菌
青春留不住,白发自然生!
7楼2015-07-03 13:25:03
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fxy031510

铜虫 (小有名气)

我也遇过,应该是种子的问题,重新筛一下菌种
8楼2015-08-03 16:25:10
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wind_king85

铜虫 (小有名气)

楼主,"这是怎么回事了,培养基配方之前都用过,没问题,发酵完测OD在7左右。"这句话怎么理解?
9楼2015-08-04 09:13:10
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