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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌发酵优化
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hehongyu

木虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌发酵优化 已有19人参与

小弟现在在做大肠杆菌发酵，基础培养基是LB培养基，37℃培养。OD反弹后菌浓约为6%，降温至24℃，加入IPTG，补加50%甘油诱导20h左右，最后菌浓为12%，酶活为50多。

现在想努力提高菌体浓度，想请教下各位：1）大肠的最高浓度可以达到多少？ 2）是否在基础培养基耗完之后，补加甘油，使菌体量升高，再加入IPTG诱导？

请各位不吝赐教！
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bics1125

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1楼 2014-08-31 12:56:30
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★
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给你一篇文嫌，OD能干到160，硕士论文《大肠杆菌高密度发酵研究》，丁兰宝，江南大学。里面有配方，可以参考哦。
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一品黄山
16楼2015-08-06 12:34:54
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hanjun80

金虫 (正式写手)
★
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嗯，大肠杆菌如果培养基成本不计的话，OD可以达到160（发酵过程不通入任何高浓度氧）。
如果用无机盐培养基的话，OD到100已经很不错了
楼主你说的12%是湿重比例吧？这个受菌泥含水量影响的
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我笃信:人定胜天！
6楼2014-09-02 10:09:04
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hunter1984

金虫 (小有名气)
★
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我们也只说OD600,12%是湿重比例吗？以前我们可以做到OD600到120，但培养基设计比较复杂，大肠杆菌只是一个表达载体，OD600能不能做到还得考虑你最终表达的产品，对大肠杆菌的负担有多大。有些产品根本就做不到高密度，我接触的一家生物药厂的OD600才做到7，但照样挣钱。所以楼主你应该把最终表达的产品说下，才能借鉴相似的产品给予你回复
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7楼2014-09-03 08:54:17
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无限美好

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by hunter1984 at 2014-09-03 08:54:17
我们也只说OD600,12%是湿重比例吗？以前我们可以做到OD600到120，但培养基设计比较复杂，大肠杆菌只是一个表达载体，OD600能不能做到还得考虑你最终表达的产品，对大肠杆菌的负担有多大。有些产品根本就做不到高密度 ...

葡萄糖氧化酶GDH和酮还原酶KRED在培养时OD可以达150，但是酶活低，请问有什么方法可以使大肠杆菌高效率表达吗？谢谢
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未婚
13楼2014-11-17 22:25:38
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
★
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12%的菌浓就不低了啊，

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-08-31 13:31:50
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hehongyu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-31 13:31:50
12%的菌浓就不低了啊，

我想能不能提高到16 ~18%呢
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3楼2014-08-31 13:39:06
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考拉003

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-09-02 09:48:19
你这是做表达还是做甘油利用实验？我们菌浓度都谈OD，不算百分数啊。od600最高到20多吧
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不是微生物专业的却进入微生物行业
4楼2014-09-02 01:07:53
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
★
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一般说OD或浊度，OD600不止20，可以再翻几倍。
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5楼2014-09-02 09:48:36
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cjm415

银虫 (初入文坛)
★
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1：OD一般都可以到80以上的，记得好像有人说好像最高能到达200以上吧。
2：一般是在起始培养基碳源耗尽后，进行一段流加到达所需要的OD值进行诱导，但是并不是OD值越高诱导越好的。具体的你自己可以摸索。
我也想请教你一个问题： 你做的应该是可溶表达的吧，请问为什么温度要选择24度并且诱导20h那么久啊。
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Sinogeneclon CO.,Ltd
8楼2014-09-03 23:02:35
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a2703521

金虫 (小有名气)

123
★
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发酵罐补料培养，做到最高的OD有200左右
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9楼2014-09-28 09:31:53
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181587941

金虫 (正式写手)
★
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我们的每次发酵到OD=150以上，就放罐，但还在长，估计能长到200的，只是没必要，工业放大做不到的。100L的罐做到150的OD没问题，你说的菌浓在200g/L以上，不同的菌种还不一样，有些更高。
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10楼2014-10-29 12:01:36
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