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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 怎么判断表达的蛋白是胞内的还是胞外的
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 怎么判断表达的蛋白是胞内的还是胞外的已有4人参与

各位虫友们，最近将一个外源基因重组转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，诱导表达之后，怎样判断表达的蛋白是胞内的还是胞外的呢？还有怎样判断形成的是包涵体还是可溶性蛋白呢？多这几个概念都很模糊，希望大家指导一下，不胜感激！
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼2015-06-05 10:10:14
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌体破碎，收集上清和包涵体，在上清即可溶性表达

[ 发自小木虫客户端 ]
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踏实
2楼2015-06-06 15:01:36
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
2楼: Originally posted by hajierlove at 2015-06-06 15:01:36
菌体破碎，收集上清和包涵体，在上清即可溶性表达

那上清和沉淀都有呢
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
3楼2015-06-08 08:30:51
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zoelxx

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-06-08 08:30:51
那上清和沉淀都有呢...

那就是可溶性和包涵体并存呗！
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4楼2015-06-08 09:02:45
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌分泌外源蛋白质经常形成包涵体，其中原因之一是表达的量太多和速度太快，但是组成包涵体的蛋白质已不是一开始就是直接结合到包涵体上，而是首先也是游离的，当然如果形成了包涵体，肯定最大量的目的蛋白质是在包涵体。

至于目的蛋白质是不是外源表达，一般设计密码时没有导肽一般不可能是外源表达的，而且能够分泌到细胞外的话，表达量都比较低，不太可能形成包涵体。
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5楼2015-06-08 09:32:30
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sonyangg

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

提个膜蛋白，跑个WB就知道了吧，不透膜做一下免疫荧光也可以
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6楼2015-06-08 15:37:56
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