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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 如何判断细菌产的胞外酶催化类型？
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为未来向前冲

木虫 (小有名气)

[求助] 如何判断细菌产的胞外酶催化类型？已有1人参与

最近分离了几种产胞外蛋白酶的细菌，发酵培养后测定其胞外酶活性，并加入四种抑制剂（PMSF,O-P,E-64，Pepstain A）来判断属于哪种酶~但是，测了几种后发现酶活和加入抑制剂后的酶活没什么区别，并且四种抑制剂之间的酶活也没什么差异，根本判断不出属于哪种酶！到底是怎么回事？跪求各位大神指点~
（ 我是在细菌发酵液中直接加的抑制剂，然后测酶活~Tris-hcl稀释，福林酚法测定）
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选择了这条路，就要勇敢地走下去，哪怕前面是悬崖峭壁！
1楼2014-04-15 10:19:01
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cx13033236

木虫 (小有名气)

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★ ★
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为未来向前冲: 金币+2 2014-04-15 15:37:43
为什么不在发酵后提取酶液后再用抑制物测定酶活呢？
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2楼2014-04-15 15:31:34
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为未来向前冲

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cx13033236 at 2014-04-15 15:31:34
为什么不在发酵后提取酶液后再用抑制物测定酶活呢？

我这做的主要是判断不同菌株产的胞外酶属于哪种酶，只要是有一个比较值就可以啦，不需要提取酶液~只是离心后取上清液，然后测酶活~
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选择了这条路，就要勇敢地走下去，哪怕前面是悬崖峭壁！
3楼2014-04-15 15:37:46
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cx13033236

木虫 (小有名气)

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 为未来向前冲 at 2014-04-15 15:37:46
我这做的主要是判断不同菌株产的胞外酶属于哪种酶，只要是有一个比较值就可以啦，不需要提取酶液~只是离心后取上清液，然后测酶活~...

我觉得仅仅只有这4种抑制剂是不是选择面不够充分啊，多加几种看看；再有就是能不能找找这种菌常分泌的是哪些酶，选择一些针对性抑制剂；或者做质谱直接找到一些官能团进行判断
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4楼2014-04-15 15:50:34
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