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为未来向前冲

木虫 (小有名气)

[求助] 如何判断细菌产的胞外酶催化类型? 已有1人参与

最近分离了几种产胞外蛋白酶的细菌,发酵培养后测定其胞外酶活性,并加入四种抑制剂(PMSF,O-P,E-64,Pepstain A)来判断属于哪种酶~但是,测了几种后发现酶活和加入抑制剂后的酶活没什么区别,并且四种抑制剂之间的酶活也没什么差异,根本判断不出属于哪种酶!到底是怎么回事?跪求各位大神指点~
( 我是在细菌发酵液中直接加的抑制剂,然后测酶活~Tris-hcl稀释,福林酚法测定)
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cx13033236

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 为未来向前冲 at 2014-04-15 15:37:46
我这做的主要是判断不同菌株产的胞外酶属于哪种酶,只要是有一个比较值就可以啦,不需要提取酶液~只是离心后取上清液,然后测酶活~...

我觉得仅仅只有这4种抑制剂是不是选择面不够充分啊,多加几种看看;再有就是能不能找找这种菌常分泌的是哪些酶,选择一些针对性抑制剂;或者做质谱直接找到一些官能团进行判断
4楼2014-04-15 15:50:34
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cx13033236

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
为未来向前冲: 金币+2 2014-04-15 15:37:43
为什么不在发酵后提取酶液后再用抑制物测定酶活呢?
2楼2014-04-15 15:31:34
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为未来向前冲

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cx13033236 at 2014-04-15 15:31:34
为什么不在发酵后提取酶液后再用抑制物测定酶活呢?

我这做的主要是判断不同菌株产的胞外酶属于哪种酶,只要是有一个比较值就可以啦,不需要提取酶液~只是离心后取上清液,然后测酶活~
选择了这条路,就要勇敢地走下去,哪怕前面是悬崖峭壁!
3楼2014-04-15 15:37:46
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