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[求助]
请教各位有pcr经验的，本人梯度pcr一直没结果 已有1人参与
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论文设计做抗性基因克隆，根据抗性蛋白得测序数据，自己设计引物序列，送公司合成，引物的tm值都在60-65之间，但是退火的温度梯度从65-55,60-50,55-45都做过梯度了，就是p不出来，和我一起做克隆的同学，我们除了模板和引物不一样，都一样，他的pcr是我带着一起的，可是我把他的p出来了，自己的p不出来，模板放在一起做对照跑胶，有条带，引物设计的数据，我自己检查很多遍，又让我那个同学从头到尾从原始数据帮我整理一遍，结果设计的引物和我自己弄的是一样的，那么引物序列是没有问题的，他的也是一样的方法，只不过菌不一样。跑胶时，可以看到引物也有引物二聚体。想请有经验的大牛帮忙分析分析，哪里还有问题，或者有什么可解决，或者检验的方法！毕业在即，人家写论文，我的实验结果还没出，哭死！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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