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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教各位有pcr经验的，本人梯度pcr一直没结果
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863813707

新虫 (小有名气)

[求助] 请教各位有pcr经验的，本人梯度pcr一直没结果 已有1人参与

论文设计做抗性基因克隆，根据抗性蛋白得测序数据，自己设计引物序列，送公司合成，引物的tm值都在60-65之间，但是退火的温度梯度从65-55,60-50,55-45都做过梯度了，就是p不出来，和我一起做克隆的同学，我们除了模板和引物不一样，都一样，他的pcr是我带着一起的，可是我把他的p出来了，自己的p不出来，模板放在一起做对照跑胶，有条带，引物设计的数据，我自己检查很多遍，又让我那个同学从头到尾从原始数据帮我整理一遍，结果设计的引物和我自己弄的是一样的，那么引物序列是没有问题的，他的也是一样的方法，只不过菌不一样。跑胶时，可以看到引物也有引物二聚体。想请有经验的大牛帮忙分析分析，哪里还有问题，或者有什么可解决，或者检验的方法！毕业在即，人家写论文，我的实验结果还没出，哭死！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-05-19 21:31:13
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-20 10:13:08
模板没问题，一般不会是模版问题。引物还是要检查，梯度后还是没有，就要看看序列的特性。比如说GC含量，再看看你目的片段的GC含量。高GC含量可能需要选择合适的酶BUFFER，或者换酶再试试。祝顺利
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863813707
2楼2015-05-19 21:46:10
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863813707

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-19 21:46:10
模板没问题，一般不会是模版问题。引物还是要检查，梯度后还是没有，就要看看序列的特性。比如说GC含量，再看看你目的片段的GC含量。高GC含量可能需要选择合适的酶BUFFER，或者换酶再试试。祝顺利

嗯嗯，谢谢，我会根据建议再试试看，整理一下，分析分析

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-05-20 00:46:23
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